[发明专利]一种唾液链球菌的发酵粗提物及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种唾液链球菌的发酵粗提物及其制备方法和应用，其制备方法包括以下步骤：(1)将唾液链球菌CGMCC NO.13308接种于含蔗糖的M17培养基中进行发酵，得到发酵液，将所得发酵液离心取上清液；(2)向步骤(1)所得的上清液中加入硫酸铵，离心收集硫酸铵饱和度为40～80％时析出的沉淀，将所得沉淀溶解后透析，冷冻干燥即得。本发明首次采用唾液链球菌CGMCC NO.13308菌株制得发酵粗提物，该唾液链球菌的发酵粗提物对变形链球菌生物膜形成具有抑制效果，披露了唾液链球菌CGMCC NO.13308具有发酵产生变形链球菌生物膜形成抑制剂的新用途，拓宽了变形链球菌生物膜形成抑制剂的来源。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种唾液链球菌的发酵粗提物及其制备方法和应用。

背景技术

龋齿，俗称虫牙、蛀牙，是一种细菌性疾病，可以继发牙髓炎和根尖周炎，甚至能引起牙槽骨和颌骨炎症。如不及时治疗，病变继续发展，形成龋洞，终至牙冠完全破坏消失，其发展的最终结果是牙齿丧失。龋齿特点是发病率高，分布广。该病是口腔主要的常见病，也是人类最普遍的疾病之一，世界卫生组织已将其与肿瘤和心血管疾病并列为人类三大重点防治疾病。

引发龋齿的因素众多，如细菌、口腔环境(食物、唾液)、宿主等，其中，细菌是龋齿发生必要条件，一般认为致龋菌有两种类型，一种是产酸菌属，其中主要为变形链球菌(Streptococcus mutans，简称S.mutans)、放线菌属和乳杆菌，可使碳水化合物分解产酸，导致牙齿无机质脱矿；另一种是革兰阳性球菌，可破坏有机质，经过长期作用可使牙齿形成龋洞。上述致龋菌中，变形链球菌被国内外学者公认为是引发龋齿的最主要和最重要的病原菌。然而上述这些病原菌并不是直接定植于牙齿表面，而是通过与变形链球菌所产生的生物膜(不溶性多糖)结合形成牙菌斑后，间接地粘附于牙齿表面，随着致龋菌不断在生物膜上的积累，龋齿的程度逐渐恶化。因此，减少其生物膜的产量也可达到防治龋齿的目的。

目前，有关龋齿治疗的研究中绝大部分报道集中于控制或降低口腔中变形链球菌的数量，然而，健康的口腔环境一般是处于有害菌与有益菌达到平衡的状态，有害菌过度的减少会带来口腔菌群失衡，进而引起人体的其他不良反应。此外，临床上使用的一些针对变形链球菌的杀菌药物，如氨硝酸银等化合物，副作用强，长期使用会令牙齿染色，故不适用于前牙治疗。而通过减少变形链球菌生物膜产量同样可降低龋齿患病风险，并且不破坏口腔菌群的固有平衡或产生副作用，但这方面的报道相对较少，尤其是与微生物有关的研究极其有限，可应用的微生物资源相当匮乏。因此，筛选并提供具有抑制变形链球菌生物膜活性的新型乳酸菌菌株并以此制备相应功能的粗提物是当务之急。上述这些都是本领域技术人员亟待解决的问题。

发明内容

基于上述技术问题，本发明提供了一种唾液链球菌的发酵粗提物及其制备方法和应用，该唾液链球菌的发酵粗提物具有抑制变形链球菌生物膜形成的效果。

具体的，一方面，本发明提供了一种唾液链球菌的发酵粗提物的制备方法，该方法包括以下步骤：

(1)将唾液链球菌CGMCC NO.13308接种于含蔗糖的M17培养基中进行发酵，得到发酵液，将所得发酵液离心取上清液；

(2)向步骤(1)所得的上清液中加入硫酸铵，离心收集硫酸铵饱和度为40～80％时析出的沉淀，将所得沉淀溶解后透析，冷冻干燥即得。

所述唾液链球菌(Streptococcus salivarius)CGMCC No.13308菌株已于2016年11月15日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编：100101。