[发明专利]一种来自解淀粉芽孢杆菌SQR9产生的十四碳链脂肪酸类拮抗物质及其应用

说明书

本发明公开了一种来自解淀粉芽孢杆菌SQR9产生的十四碳链脂肪酸类拮抗物质及其应用。该十四碳链脂肪酸类拮抗物质分子式为C₁₅H₃₀O₃，具有抗菌谱广，对植物病原真菌及病原细菌有良好的生长抑制活性的优点，对病原真菌、细菌的生长抑制效果显著，安全稳定，具有广泛的应用前景；能够在抑制植物病原真菌及病原细菌生长中应用。

技术领域

本发明属于微生物领域，具体一种来自解淀粉芽孢杆菌SQR9产生的十四碳链脂肪酸类拮抗物质及其应用。

技术背景

抗生素(Antibiotics)是由微生物包括细菌、真菌、放线菌属或高等动植物在生活过程中所产生的具有抗病原体或其它活性的一类次级代谢产物。抗生素滥用使细菌逐渐产生耐药基因，使抗生素药物效果变差，甚至无效。而且，细菌耐药性可以相互传播的，使细菌耐药性复杂化，因此急需寻找新型抗生素解决现在面临的问题。寻找新型抗生素的传统方法为在不同条件下培养新分离的菌株，再将发酵产品分离纯化，最后鉴定得到新型的抗生素。但随着近些年来基因组测序技术的发展，全基因组数据分析提供了一种发现与活性物质合成相关基因簇的途径。脂肪酸结构简单，但是具有多种生物学活性，其中一个就是可以抑制寄生虫或植物病原菌的生长，具有很好的应用前景。

解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)在自然界中分布广泛，对人、畜无毒无害，不污染环境，具有很高的抗逆能力。研究表明，解淀粉芽孢杆菌具有广谱的抑制真菌和细菌的活性，且生长速度快，稳定性强，是一种理想的生防菌资源。解淀粉芽孢杆菌能分泌多种抗生素类物质，如脂肽类抗生素(surfactin、bacillomycin D、fengycin)；聚酮类抗生素(macrolactin、difficidin、bacillaene)；小分子抗生素bacilysin等。

发明内容

本发明的目的要解决的问题是提供一种由解淀粉芽孢杆菌SQR9发酵一种十四碳链脂肪酸类拮抗物质。

本发明的另一目的是提供该拮抗物质的提取分离方法。

本发明的又一目的是提供该拮抗物质的应用。

一种来自解淀粉芽孢杆菌SQR9产生的十四碳链脂肪酸类拮抗物质,结构如下所示:

一种从解淀粉芽孢杆菌SQR9中分离所述的十四碳链脂肪酸类拮抗物质的方法,包括：发酵保藏编号为CGMCC NO.5808的解淀粉芽孢杆菌SQR9，发酵结束后，将发酵液离心，收集上清液，上清液干燥去除水分后，用甲醇浸提，浓缩浸提液得浸膏；浸膏上硅胶柱，以氯仿-甲醇梯度洗脱，收集氯仿-甲醇体积比20:1的洗脱液；将氯仿-甲醇20:1洗脱液去除溶剂后用甲醇溶解，进一步运用MPLC ODS色谱柱用甲醇-水梯度洗脱，收集体积分数80％甲醇-水洗脱液进一步运用反相HPLC法进行深入的分离纯化，在乙腈-水65:35，流速2mL/min，检测波长为210nm,Rt＝10.4下得到权利要求1所述的十四碳链脂肪酸类拮抗物质。

发酵保藏编号为CGMCC NO.5808的解淀粉芽孢杆菌SQR9的发酵培养基优选Landy培养基。

解淀粉芽孢杆菌SQR9的发酵方法优选包括：按1％的接种量将SQR9种子液转接到新鲜的Landy培养基锥形瓶中，37℃，170rpm，12h；再将培养后的菌液接种到7L的小型发酵罐中，发酵罐中填充5L的Landy培养基，37℃，200rpm培养12h；将7L发酵罐中的菌液接种到150L发酵罐中，发酵罐中填充100L的Landy培养基，开始时转速为30℃，转速200rpm，溶氧值75，消泡剂为聚醚类化合物，当溶氧值开始降到30以下时，逐渐提高转速，最高为500rpm，同时增加通气量，将溶氧值保持在10以上，直至OD600＝15，此时将转速调至200rpm，通气量降低至最小，保持OD，菌液进入稳定期，开始大量产生次级代谢产物，发酵24h。