[发明专利]一种评价烟草主流烟气诱发炎症反应用动物体外气管模型建立方法、评价方法有效
| 申请号： | 201710796458.6 | 申请日： | 2017-09-06 |
| 公开（公告）号： | CN107607699B | 公开（公告）日： | 2019-12-27 |
| 发明（设计）人： | 陈雪梅;李翔;谢复炜;刘惠民;薛博涵;李玉萍;周淑娅;石小雨;华辰凤;乔梁峻;康彧 | 申请（专利权）人： | 中国烟草总公司郑州烟草研究院;郑州大学 |
| 主分类号： | G01N33/50 | 分类号： | G01N33/50;G01N33/68;G01N33/533;G01N33/535;G01N33/543;C12Q1/6883 |
| 代理公司： | 41119 郑州睿信知识产权代理有限公司 | 代理人： | 牛爱周 |
| 地址： | 450001 *** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 评价 烟草 主流 烟气 诱发 炎症 应用 动物 体外 气管 模型 建立 方法 | ||
1.一种评价烟草主流烟气诱发炎症反应的评价方法，其特征在于：包括以下步骤：
A. 建立动物体外气管模型：
1）将冲洗好的成年雄性大鼠气管切成2-6段，每段4-12个软骨环；
2）使用BGEM培养基采用三维立体培养方式培养步骤1）得到切好的气管环1.5-2.5h；
3）将步骤2）培养后的气管环在含烟气冷凝物的培养基中暴露培养2-10h；
所述含烟气冷凝物的培养基由包括如下步骤的方法制得：采用吸烟机提取待测烟的烟气冷凝物，溶于DMSO溶液后，得烟气冷凝物溶液，然后加入组织培养基中，即可；所述含烟气冷凝物的培养基中烟气冷凝物的浓度为50-200μg/mL；
B. 选择检测炎症细胞浸润生长情况、IL6基因表达量、ICAM-1基因表达量、炎症因子蛋白含量及细胞增殖活性作为评价指标，划分评价标准；
C. 评价烟草主流烟气诱发炎症反应的程度。
2.根据权利要求1所述的评价方法，其特征在于：采用HE染色，并通过显微镜观察所述炎症细胞浸润生长情况。
3.根据权利要求1所述的评价方法，其特征在于：采用qRT-PCR检测所述IL6及ICAM-1基因的表达量。
4.根据权利要求1所述的评价方法，其特征在于：采用IL6和ICAM-1的ELISA试剂盒检测所述炎症因子蛋白表达量。
5.根据权利要求1所述的评价方法，其特征在于：采用含CCK-8的培养基检测所述细胞增殖活性。
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