[发明专利]检测MTB喹诺酮类药物耐药基因gyrA突变的试剂盒及其方法和用途

权利要求书

1.一种检测MTB喹诺酮类药物耐药基因gyrA突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒至少包括：gyrA基因检测引物，所述gyrA基因检测引物至少有3种，其序列分别如SEQ IDNO.1、SEQ ID NO.2以及SEQ ID NO.3所示。

2.根据权利要求1所述的检测MTB喹诺酮类药物耐药基因gyrA突变的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中包含两种独立包装的引物对，其中一个包装含有的引物如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，另外一个包装含有的引物对如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.3所示。

3.根据权利要求1所述的检测MTB喹诺酮类药物耐药基因gyrA突变的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还含有无菌水、dNTP、PCR buffer、rTaq酶、样品基因组DNA提取试剂中的一种或多种。

4.根据权利要求1所述的检测MTB喹诺酮类药物耐药基因gyrA突变的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中还含有阳性对照，所述阳性对照为含有第88、90和94位密码子突变的结核分枝杆菌gyrA基因DNA样本。

5.如权利要求1～4任意项所述的试剂盒的使用方法，至少包括以下步骤：

(1)提取样品基因组DNA；

(2)将样品基因组DNA加入装有PCR反应体系的PCR管中，获得样品反应管，所述PCR反应体系中含有gyrA基因检测引物序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；

(3)第一轮PCR反应：反应管置于PCR仪上，设置循环参数，进行PCR反应，获得第一轮PCR反应产物；

(4)取第一轮PCR反应产物作为第二轮PCR的模板，加入装有PCR反应体系的PCR反应管中，同时加入引物，引物序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.3所示；

(5)第二轮PCR反应：反应管置于PCR仪上，设置循环参数，进行PCR反应，获得第二轮PCR反应产物；

(6)PCR反应结束后，分析结果。

6.根据权利要求5所述的使用方法，其特征在于：所述步骤(3)中的反应条件设置为(a)95.0℃5min；(b)95℃30s；62℃30s；72℃40s，步骤(b)循环15次，每次循环的中间步骤比上次循环降低0.5°最终使得62°降落至55°，(c)95℃30s；55℃30s；72℃40s；步骤(c)循环25次；(d)72°10min。

7.根据权利要求1所述的使用方法，其特征在于步骤(5)中的反应条件与步骤(3)相同。

8.如权利要求1～4任意项权利要求所述的检测MTB喹诺酮类药物耐药基因gyrA突变的试剂盒在制备gyrA基因检测产品中的用途。

9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述检测产品用于检测和筛选耐喹诺酮类药物的结核分枝杆菌。