[发明专利]人心肌肌钙蛋白I的杂交瘤细胞株7H4及单克隆抗体和应用

说明书

本发明公开了人心肌肌钙蛋白I的杂交瘤细胞株7H4及单克隆抗体和应用。所述杂交瘤细胞株7H4于2017年8月23日保存在中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏编号为CCTCC NO：C2017121。杂交瘤细胞株7H4分泌的单克隆抗体7H4是一种高亲和力、高特异性的cTnI鼠源性单克隆抗体，能够结合游离的cTnI、二聚体复合物cTnI‑C、三聚体复合物cTnI‑T‑C三种形式的cTnI，因此可以用于检测血清中cTnI含量，为开发快速检测心肌梗塞试剂盒奠定基础。

技术领域

本发明涉及细胞免疫技术领域，更具体地，涉及人心肌肌钙蛋白I的杂交瘤细胞株7H4及单克隆抗体和应用。

背景技术

心肌肌钙蛋白是调控心脏收缩的关键蛋白。由心肌肌钙蛋白I（cTnI）、心肌肌钙蛋白C（cTnC）和心肌肌钙蛋白T（cTnT）三个亚基组成的三聚体复合物。cTnI是肌动蛋白的抑制亚基，通过抑制肌动蛋白的三磷酸腺苷（ATPase）的活性来调控肌动蛋白和肌球蛋白的相互作用。cTnI的分子量约为24kDa，由209个氨基酸组成，是一种富含α螺旋的蛋白，理论等电点为9.87。TnI（肌钙蛋白I）存在三种亚型：骨骼肌肌钙蛋白I（sTnI）中存在快骨骼肌型和慢骨骼肌型，它们具有相似的分子量（20KD），但二者之间的氨基酸序列约存在40%的差异；第三种为心肌型。心肌肌钙蛋白I（cTnI）与骨骼肌型的氨基酸序列也存在40%的差异，cTnI末端比sTnI末端多31个氨基酸，并且cTnI在心肌细胞中只存在一种亚型，决定了cTnI在心肌细胞中的特异性。cTnI分子的第22位和第23位是丝氨酸。这两个氨基酸都可以在体内被蛋白激酶A磷酸化，因而在体内cTnI存在四种不同磷酸化类型。

急性心肌梗塞（Acute myocardial infarction, AMI）是最常见的心血管疾病之一，是在冠状动脉病变的基础上，冠状动脉的血流急剧减少或中断，使相应的心肌出现严重而持久地急性缺血所导致的冠状动脉病变，最终引起心肌的缺血性坏死。病情严重时，心脏无法再行使其泵血的功能，会导致病人突然死亡。因此，急性心肌梗塞的早期诊断对于其预防和治疗是非常重要的。cTnI被研究者认为是AMI诊断最好的生物指标之一，由于其在心肌受损时才在血液中出现，并且出现时间早，持续时间久，特异性强，因此国际临床化学联盟（IFCC）、美国临床生化学会（NACB）和中华医学检验分会等权威机构已经将cTnI作为AMI诊断的“金标准”。

在心肌梗塞标志物中，cTnI被认为是比其他标志物更灵敏，特异性更高的“金标”。当心肌细胞的细胞膜完整时，cTnI是不能够透过细胞膜进入到血液中的。只有当心肌细胞受损时，cTnI迅速从心肌细胞释放到血液中，2～8小时内开始升高，在1-2天内达到顶峰，并且在3-8天后仍然能测到cTnI的量在升高，理论上cTnI在血清中维持的时间超过10天，较久的诊断窗口期对于心肌梗塞的诊断是非常重要的。研究证明，正常人和心肌梗塞患者血清中cTnI的临界值是50pg/mL，发病时血中浓度可达100～300μg/L。在血液中大部分的cTnI是以cTnI-T-C或者cTnI-C复合物的形式存在。在研究中发现cTnI开始是以单体的形式释放到血液中，但是随着心肌损伤程度增加，为了防止cTnI被降解，cTnI会以复合物的形式存在，接着由于各种因素的影响，复合物又分解成单体，所以用于检测cTnI的抗体应该能以同样的效率识别血液中各种复合形式的cTnI，而现有技术中严重缺乏这样的单克隆抗体资源。

发明内容

本发明为了克服现有技术中的上述不足，提供一株人心肌肌钙蛋白I的杂交瘤细胞株7H4。

本发明的另一个目的是提供上述杂交瘤细胞株7H4分泌的单克隆抗体，单克隆抗体命名为人心肌肌钙蛋白I单克隆抗体7H4，单克隆抗体7H4是一种高亲和力、高特异性的cTnI鼠源性单克隆抗体，能够结合游离的cTnI、二聚体复合物cTnI-C、三聚体复合物cTnI-T-C三种形式的cTnI，因此可以用于检测血清中cTnI含量，为开发快速检测心肌梗塞试剂盒奠定基础。