[发明专利]一组柞蚕微孢子虫检测引物及其应用

权利要求书

1.一组柞蚕微孢子虫检测引物，其碱基序列如SEQ ID NO.1~3所示。

2.权利要求1所述引物在进行柞蚕微孢子虫检测方面的应用，其特征在于，所述检测采用重组酶聚合扩增技术；包括对模板DNA进行重组酶聚合扩增反应的方法，配置反应体系为：

反应条件为37~40℃，扩增时间为5~60分钟。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：模板DNA的获取方法如下：

用碱溶液对待测柞蚕微孢子虫样本进行裂解处理，用磁珠进行DNA的富集、分离与纯化。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述碱为无机碱；碱溶液的浓度是0.05~1M；所述碱溶液中还含有浓度为10%以下的十二烷基硫酸钠。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述裂解处理过程的处理时间为1分钟~40天；处理温度为-20~40℃；所述处理过程还包含零到多次的冻融过程，单次冷冻时间为10分钟~40天。

6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：在用磁珠进行DNA的富集、分离与纯化的过程中，将磁性微球直接放入含有待测样本的混合溶液中，然后利用外部磁场进行分离，分离后采用ddH₂O、TE缓冲液或PCR反应液洗脱。

7.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述磁珠为含有二氧化硅和四氧化三铁成分的磁性微球。

8.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述用磁珠进行DNA富集的过程，是将磁珠或者磁珠的悬浮液加入所述碱溶液中，混匀，静置片刻；所述碱溶液中还加有无水乙醇，无水乙醇与碱溶液的体积比为0.7~1:1。

9.一种柞蚕微孢子虫分子检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物，及选自权利要求2~8中任一项所述应用的方法中所使用的试剂组合。