[发明专利]一种与烤烟品种TT7白粉病抗性紧密连锁的分子标记及其用途

说明书

本发明公开了一种与烤烟品种TT7白粉病抗性紧密连锁的分子标记及其在辅助选择育种中的用途，属于农业生物技术范畴。以抗白粉病烟草TT7和感病烟草K326杂交构建F1、F2及BC群体，利用连锁定位在定位区段内开发分子标记S1、R1和S2、R2，与白粉病抗病表型共分离。使用这4对标记对后代进行PCR扩增，不同引物能扩增出相应大小的特异片段并可有效区分杂合基因型，属共显性分子标记，可追踪烟草TT7中的抗白粉病基因在后代中的遗传情况，明确后代的基因型，并可用于白粉病抗病后代筛选。

技术领域

本发明涉及一种与烤烟品种TT7(台烟7号)白粉病抗性紧密连锁的分子标记及其用途，属于农业生物技术领域。

背景技术

烟草白粉病俗称“上灰”、“下霜”、“上硝”，该病多危害成熟老叶，由下向上发展。叶片发病，初为近圆形的黄褐色小斑，后斑上现白色粉状小点，使病斑呈毯状，斑块扩大，白粉布满整个叶片，病叶先褪绿变褐，后枯死。严重时为害嫩茎，病茎上也布满白粉。病叶烘烤后薄如纸，色暗锈褐色，丧失经济价值。白粉病在中国各烟区均有发生，其中以华南、西南和华中烟区最为普遍，危害也较重。目前烟草白粉病的防治主要以化学防治为主，极易造成农药残留，是当前烟叶农残超标的主要因素。

培育抗病烟草新品系是防治烟草白粉病最经济、安全和有效的方法。由于传统育种对抗白粉病性状的选择主要依靠田间自然发病和人工接种，这样的选育方法不仅受植株生长发育阶段和环境条件的影响，而且耗时、耗力。此外，目前烟草白粉病仅依赖于接种后抗性鉴定和经验育种，抗性很容易丢失，没有高效的分子辅助选择手段。分子标记是一种快速、简便、成本低廉并可在烟草生长早期进行无损检测的一种技术,但目前还没有对白粉病抗性基因特异性共显性分子标记的报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提供一种与烤烟品种TT7白粉病抗性紧密连锁的分子标记，可在苗期白粉病未发病前对烟草育种后代材料中的抗白粉病基因进行分子标记辅助选择，可明确后代单株基因型，有效区分纯合单株和杂合单株，无需自交一代，显著提高育种效率，缩短育种周期，快速、简便、成本低廉并可在烟草生长早期进行无损检测烟草白粉病的一种技术，填补了烟草白粉病分子标记辅助选择育种技术的空白。

本发明的技术方案是：一种与烤烟品种TT7白粉病抗性紧密连锁的分子标记，所述的分子标记序列为seq ID No.1、seq ID No.2、seq ID No.3和seq ID No.4。

扩增与烤烟品种TT7白粉病抗性紧密连锁的分子标记对应的引物对，所述的引物对为S1-F1/1-R、R1-F1/1-R、S2-F1/2-R和R2-F1/2-R，其中，S1-F1的序列为：5’-AATTAACTTTGGTCCAAACTAG-3’，R1-F1的序列为：5’-AATTAACTTTGGTCCAAACTTA-3’,1-R的序列为：5’-TTAGATGTGTGATAGGGTCAGTTAG-3’,S2-F1的序列为：5’-GGTGCTGCTCTGGATAGTCAG-3’，R2-F1的序列为：5’-GGTGCTGCTCTGGATAGTCTC-3’，2-R的序列为：5’-ACAATCTAAAAGTGTAGTTTGGTGG-3’。

一种与烤烟品种TT7白粉病抗性紧密连锁的分子标记，所述的分子标记是由上述的引物对以烟草白粉病抗性烟草基因组或烟草白粉病感病烟草基因组DNA为模板经PCR扩增得到。

由上述引物对扩增得到的分子标记含有seq ID No.1、seq ID No.2、seq ID No.3或seq ID No.4所示序列。

一种载体，含有本发明的分子标记。所述的重组载体是插入有本发明的分子标记的表达载体或者克隆载体。含有前述重组载体的重组细胞。

一种与烤烟品种TT7白粉病抗性紧密连锁的分子标记的检测方法，根据所述的分子标记的核苷酸序列设计引物，以被检测烟草基因组DNA为模板进行扩增，并判断扩增产物中是否存在该分子标记。