[发明专利]一种用于血清中galectin-3浓度检测的电化学传感器制备方法

权利要求书

1.一种用于血清中半乳糖凝集素-3浓度检测的电化学传感器制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)氮掺杂石墨烯纳米带的制备：

称取0.1g氮掺杂多壁碳纳米管加入至10mL的H₂SO₄和H₃PO₄混合溶液中混匀，将混合溶液置于高压反应釜中在磁力搅拌条件下加热至140℃持续10min，再将反应混合溶液转移至65℃油浴中在搅拌条件下加入0.25g高锰酸钾持续反应8min，反应结束后控制溶液降温至室温，所得溶液经10000r/min，离心5min，用超纯水清洗3次，将所得沉淀真空干燥24h后，4℃保存备用；

(2)铁金属有机框架的制备：

称取0.187g六水合氯化铁和0.126g 2-氨基对苯二甲酸加入15mL的二甲基甲酰胺溶液中，混匀，将混合溶液置于120℃硅油中加热4h，在开始加热后第15min时，向混合溶液中加入200μL的冰醋酸，加热结束后控制溶液降温至室温，所得溶液经10000r/min，离心5min，将离心所得沉淀分别用DMF，无水乙醇，超纯水各清洗3次，最后将所得沉淀真空干燥24h后，4℃保存备用；

(3)铁金属有机框架@金纳米颗粒复合材料的制备：

取2mL,1％的四水合氯金酸溶液加入到制备好的2mL,1mg mL^-1的铁金属有机框架溶液中，剧烈超声30分钟后，向上述溶液中逐滴缓慢加入4mL,0.1M的硼氢化钠溶液，同时放在磁力搅拌器上进行搅拌反应30min，所得溶液经10000r/min，离心5min，用超纯水清洗3次，将所得沉淀再分散至4mL的去离子水中，4℃保存备用；

(4)氮掺杂石墨烯纳米带-铁金属有机框架@金纳米颗粒复合材料的制备：

称取0.2mg氮掺杂石墨烯纳米带超声溶解于2mL的去离子水中，将其与4mL制备好的铁金属有机框架@金纳米颗粒复合物溶液超声混匀30min，在磁力搅拌500r/min条件下，搅拌过夜，所得溶液经8000r/min，离心5min，用超纯水清洗3次，将所得沉淀再分散至4mL的去离子水中，4℃保存备用；

(5)金铂-亚甲蓝的制备：

分别取600μL,0.1M的盐酸和6mL,1.14mM的十二烷基三甲基溴化铵加入至1mL,9.8mM的亚甲蓝溶液中，剧烈搅拌10min，然后加入100μL,4wt％的氯金酸溶液和100μL,4wt％的氯铂酸溶液，持续室温搅拌6h，所得溶液经8000r/min，离心10min，用超纯水清洗3次，将所得沉淀再分散至2mL,0.1M,pH 7.0的PBS缓冲溶液中，4℃保存备用；

(6)金铂-亚甲蓝-第二抗体的制备：

取100μL半乳糖凝集素-3特异性检测第二抗体加入至2mL金铂-亚甲蓝纳米复合材料溶液中，在4℃条件下温和搅拌，持续12h，加入40μL,1wt％的牛血清白蛋白在4℃条件下持续温和搅拌6h，所得溶液经8000r/min，离心10min，将所得沉淀再分散至2mL,0.1M,pH 7.0的PBS缓冲溶液中，4℃保存备用；

(7)建立电化学传感器：

a、分别用0.3和0.05μm的氧化铝粉末将电极抛光成镜面，然后分别按超纯水、无水乙醇、超纯水的顺序超声电极各5min，室温干燥备用；

b、将6μL所制备的氮掺杂石墨烯纳米带-铁金属有机框架@金纳米颗粒复合材料溶液滴加在电极表面，室温干燥；

c、滴加6μL半乳糖凝集素-3特异性捕获第一抗体溶液至被修饰的电极表面，4℃孵育12h；

d、用双蒸水将孵育后的电极冲洗干净，在电极表面滴加6μL，1wt％的BSA，室温封闭30min；

e、将上述BSA封闭后的电极用含有10mM Na₂HPO₄,2mM KH₂PO₄,37mM NaCl,2.7mM KCl,pH7.4的清洗缓冲液冲洗干净并在氮气中干燥。

2.依据权利要求1所述的制备方法获得的传感器实现的半乳糖凝集素-3的定量检测方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)将6μL不同浓度的目标半乳糖凝集素-3滴加至电极表面，37℃孵育1h用清洗缓冲液冲洗干净并在氮气中干燥；

(2)在干燥后电极表面滴加10μL所制备的金铂-亚甲蓝-第二抗体溶液，37℃孵育1h用清洗缓冲液冲洗干净并在氮气中干燥；

(3)将电极置于5mL,0.1M,pH 7.0的PBS中进行表征,测量其电流变化电流响应峰值；

(4)根据所得电流变化电流响应峰值与半乳糖凝集素-3浓度呈线性关系，绘制工作曲线。