[发明专利]一种用于重金属铅污染物检测的电化学传感器制备方法

权利要求书

1.一种用于重金属铅污染物检测的电化学传感器制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)铁的金属有机框架(Fe-MOFs)-双金属钯铂(PdPt NPs)-hairpin DNA检测探针的制备，具体包括一下步骤：首先完成Fe-MOFs纳米材料的制备，将0.692mM 2-氨基对苯二甲酸和0.692mM FeCl₃·6H₂O分散进15mL的DMF溶液中，得到的混合溶液在油浴中加热至120℃，在加热15分钟后，加入3.45mM醋酸，持续加热4小时后得到Fe-MOFs混合溶液，经过离心清洗后，真空干燥得到固体状Fe-MOFs复合材料；紧接着完成Fe-MOFs-PdPt NPs纳米复合材料的制备，将1mg的Fe-MOFs加入1mL的超纯水中，超声5分钟，之后加入0.5mL 1％H₂PtCL₆和0.5mL1％Na₂PdCl₄，继续超声15分钟，然后在所得到的溶液中逐滴滴入2mL0.1M NaBH₄水溶液，在400rpm下搅拌30min，即得到Fe-MOFs/PdPt NPs混合溶液，离心三次并用超纯水清洗后，溶入1mL超纯水备用；最后完成Fe-MOFs-PdPt NPs-hairpin DNA复合物的制备，将标记了巯基的Complementary DNA形成茎环，增加实验的特异性，将2μM Complementary DNA在95℃加热5分钟，然后冷却至室温至少保持2小时，得到形成茎环的单链DNA(hairpin DNA)，随后将200μL 2μm hairpin DNA加入已制备好的Fe-MOFs/PdPt NPs混合溶液中在4℃轻微搅拌，过夜，然后加入牛血清白蛋白封闭非特异性结合位点，得到Fe-MOFs/PdPt NPs-HP-BSA混合物，经过离心三次，并用超纯水清洗后，溶入到1mL的杂交缓冲溶液中，储存在4℃等待使用；

(2)建立电化学生物传感器，测定重金属铅离子，绘制标准曲线。

2.根据权利要求1所述的一种用于重金属铅污染物检测的电化学传感器制备方法，其特征在于：所述的建立电化学生物传感器，测定重金属铅离子，绘制标准曲线具体包括以下步骤：

(1)分别用0.3和0.05μm的Al₂O₃粉末将电极抛光成镜面，然后分别按超纯水、无水乙醇、超纯水的顺序超声电极各5min，室温干燥备用；

(2)将10μL电极修饰材料还原性氧化石墨烯四乙烯五胺-金纳米粒子(rGO-TEPA-Au)滴加在电极表面，室温干燥；

(3)将10μL，100μg mL^-1亲和素结合在干燥后的电极表面，4℃孵育12h；

(4)用超纯水将电极冲洗干净后滴加10μL，1μM生物素标记的底物链(substratestrand)溶液，4℃孵育45min；

(5)用超纯水将孵育后的电极冲洗干净后滴加10μL，1％的BSA溶液室温孵育30min；

(6)将上述BSA封闭后的电极冲洗干净后滴加10μL，1μM的催化链(catalytic strand)溶液，37℃孵育2h；

(7)将不同浓度的目标Pb²⁺滴加在电极上并置于37℃孵育40min；

(8)在干燥后的电极上滴加10μL检测探针混合液置于37℃孵育2h；

(9)将孵育后的电极用清洗缓冲液冲洗干净后置于氮气中干燥；

(10)将电极置于5mL，包含0.1M Na₂HPO₄，0.1M KH₂PO₄，0.1M KCl的0.1M PBS溶液中进行表征，每隔50s加入20μL，1.8M H₂O₂，测量其计时电流变化电流值；

(11)根据所得电流变化值与重金属铅离子浓度呈线性关系，绘制工作曲线。