[发明专利]一组用于区分芝麻13对染色体的BAC标记

权利要求书

1.一组用于区分芝麻13对染色体的BAC标记，其特征在于，该BAC组标记共包括16个BAC标记，BAC双末端碱基序列信息如SEQ ID NO.1、2、5~34所示；

其中，探针名称中“G”表示该探针为绿色荧光标记，“R”表示该探针为红色荧光标记。

2.利用权利要求1所述BAC标记区分芝麻13对染色体的区分方法，其特征在于，包括如下操作步骤：

（一）芝麻染色体标本制备

以芝麻根尖作为样品，制备根尖染色体片标本；

（二）制备BAC探针

对所述用于区分13对芝麻染色体的BAC标记进行荧光标记；

（三）荧光原位杂交

利用步骤（二）中标记后的BAC探针对步骤（一）中的染色体标本进行标记；

（四）区分染色体

对步骤（三）中最后BAC-FISH杂交结果图片进行整合分析，对13条芝麻染色体进行编号并进行区分；具体区分时，参考如下芝麻13个染色体组核型进行区分：

在对芝麻13对染色体进行区分时，Chr.2、Chr.4和Chr.7上各有2个特异BAC标记，其余10对染色体上各有1个特异BAC标记；

53G探针标记在1号染色体的短臂区；

87R、48G探针标记在2号染色体的长臂区；

25G探针标记在3号染色体的短臂区；

39G、15R探针标记在4号染色体的短臂区；

42R探针标记在5号染色体的长臂区；

102R探针标记在6号染色体的短臂区；

76R、21R探针标记在7号染色体的长臂区；

57G探针标记在8号染色体的长臂区；

3R探针标记在9号染色体的长臂近着丝粒区；

31G探针标记在10号染色体的短臂区；

4G探针标记在11号染色体的长臂区；

68R探针标记在12号染色体的长臂区；

54R探针标记在13号染色体的长臂区。

3.如权利要求2所述的区分芝麻13对染色体的区分方法，其特征在于，步骤（一）中，以豫芝11号种子的1.2~1.8cm根尖作为样品，制备芝麻染色体标本。

4.如权利要求3所述的区分芝麻13对染色体的区分方法，其特征在于，制备芝麻染色体标本时，按如下步骤进行制备：

（1）取健康芝麻种子，播于铺有湿滤纸的培养皿中，21℃暗培养长根；

（2）取1.2~1.8cm长根尖，将4~5mm根尖顶端部位切下，并置于玻瓶中，加入0.002M 的8-羟基喹啉中，21℃避光预处理1h，转移根尖至固定液中，4℃固定1h；

（3）蒸馏水浸洗2~3次后，切取1mm左右处根尖分生区，然后每10个根尖分生区加入20µL混合酶液，35~40℃酶解2~3h；

（4）随后取出根尖分生区，蒸馏水中浸洗10~20 min；将根尖分生区置于固定液，4℃固定1 h；

（5）取根尖分生区，置于预冷洁净玻片上，制成局部细胞悬液；然后滴加固定液使悬液分散于整个玻片，自然晾干；

（6）用吉姆萨染液染色15 min，然后自来水冲洗，自然晾干；

荧光显微镜下，挑选高质量染色体标本，并标记目标染色体所在区域，记录每组染色体对应的坐标位置。

5.如权利要求2所述的区分芝麻13对染色体的区分方法，其特征在于，步骤（二）中，采用随机引物法进行BAC探针标记。

6.如权利要求2所述的区分芝麻13对染色体的区分方法，其特征在于，步骤（三）中，荧光原位杂交时，采用BAC-FISH连续杂交技术。