[发明专利]橡胶树胚性愈伤组织的低温保存培养基及其低温保存方法

权利要求书

1.一种橡胶树胚性愈伤组织的低温保存方法，其特征在于，包括以下步骤：将胚性愈伤组织接种到橡胶树胚性愈伤组织的低温保存培养基上，在3～8℃条件下保存；

所述橡胶树胚性愈伤组织的低温保存培养基，以改良MS为基本培养基，包括以下含量组分：L-谷氨酰胺250～350mg/L、维生素C 0.3～0.8mg/L、水杨酸18～23mg/L、水解酪蛋白280～320mg/L、椰子汁体积浓度8％～12％、蔗糖65～75g/L、活性炭质量浓度0.08％～0.12％和植物凝胶2.0～2.5g/L；

所述改良MS培养基以水为溶剂，包括硝酸铵1100mg/L、硝酸钾1267mg/L、二水氯化钙800mg/L、七水硫酸镁247mg/L、磷酸二氢钾226mg/L、碘化钾0.83mg/L、硼酸9mg/L、四水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸1mg/L、盐酸硫胺素VB 15.0mg/L、盐酸吡哆醇VB 6 1.0mg/L、烟酸1mg/L和生物素VH0.05mg/L；

所述低温保存培养基的pH值为5.6～6.0。

2.根据权利要求1所述的低温保存方法，其特征在于，所述保存的温度为4～6℃。

3.根据权利要求1所述的低温保存方法，其特征在于，以改良MS为基本培养基，包括以下含量组分：L-谷氨酰胺300mg/L、维生素C 0.5mg/L、水杨酸20mg/L、水解酪蛋白300mg/L、椰子汁体积浓度为10％、蔗糖70g/L、活性炭质量浓度为0.1％和植物凝胶2.3g/L。

4.根据权利要求1所述的低温保存方法，其特征在于，所述低温保存培养基的pH值为5.8。

5.一种低温保存的橡胶树胚性愈伤组织恢复生长方法，其特征在于，包括以下步骤：将权利要求1～4任意一项所述方法得到的低温保存的胚性愈伤组织和子叶形体细胞胚状体组织同步接种在活化培养基上共同培养；

所述活化培养基为以改良MS为基本培养基，包括以下含量组分：L-谷氨酰胺250～350mg/L、维生素C 0.3～0.8mg/L、水解酪蛋白280～320mg/L、椰子汁体积浓度8％～12％、蔗糖65～75g/L、活性炭质量浓度0.08％～0.12％和植物凝胶2.0～2.5g/L；

所述改良MS培养基以水为溶剂，包括硝酸铵1100mg/L、硝酸钾1267mg/L、二水氯化钙800mg/L、七水硫酸镁247mg/L、磷酸二氢钾226mg/L、碘化钾0.83mg/L、硼酸9mg/L、四水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸1mg/L、盐酸硫胺素VB 1 5.0mg/L、盐酸吡哆醇VB 6 1.0mg/L、烟酸1mg/L和生物素VH0.05mg/L；

所述活化培养基的pH值为5.6～6.0。

6.根据权利要求5所述的恢复生长方法，其特征在于，所述胚性愈伤组织和子叶形体细胞胚状体组织体积比为1：0.8～1.2。

7.根据权利要求5或6所述的恢复生长方法，其特征在于，所述子叶形体细胞胚状体组织为生长发育正常且单片子叶宽为5～7mm的体细胞胚状体切块组织。

8.根据权利要求5或6所述的恢复生长方法，其特征在于，所述共同培养的条件包括：白天温度为23～27℃，夜晚温度为21～25℃；环境相对湿度为78％～82％。