[发明专利]一种直接获取智利小植绥螨生殖系统的方法

说明书

技术领域

本技术涉及一种直接获取智利小植绥螨生殖系统的方法，属于智利小植绥螨生物学基础研究领域。

背景技术

智利小植绥螨生殖具有特殊性，雌螨若不交配则不会产卵，并且认为所有的后代均由受精卵发育而来；而雌螨是二倍体，雄螨为单倍体。除此以外，智利小植绥螨第一粒卵均发育为雄螨，第二粒卵发育为雌螨。因此，第一粒卵一定是单倍体，而第二粒卵一定为二倍体。如果能够弄清第一粒卵与第二粒卵在发育上的差异，就意味着明确了雌雄个体的发育过程中的差异，也就为揭示智利小植绥螨的生殖机理找到了直接证据。

要想明确第一粒卵与第二粒卵（即雌与雄）的发育差异，就要分别了解两粒卵的受精过程，而智利小植绥螨受精过程都是在其生殖系统中完成的、不容易看到。智利小植绥螨生殖系统是其体内和生殖密切相关的器官成分，是智利小植绥螨产生生殖细胞用来繁殖后代的系统。如果能够对智利小植绥螨的生殖系统进行定时、定位分析，就能够直接地观察分析其雌、雄受精卵发育的全过程。

但对于智利小植绥螨的生殖系统来说，由于智利小植绥螨的个体太小且体内被不透明的体液充满，我们无法对其生殖系统进行准确定位，如果想要单独把生殖系统分离出来利用现有技术是根本无法实现的。

发明内容

本发明的目的是提供一种可以直接获取智利小植绥螨生殖系统的方法，应用本方法在能够准确的对智利小植绥螨雌螨和雄螨生殖系统进行定位，并且能够将智利小植绥螨雌螨、雄螨的生殖系统单独分离出来。

本发明是先获得交配中的智利小植绥螨雌螨、雄螨，再通过乳酸浸泡、脱水、干燥处理，最后获取智利小植绥螨雌螨、雄螨生殖系统的方法，具体操作为：

（1）交配中雌雄螨的获取：在显微镜下，从智利小植绥螨饲养种群内，挑出卵单独饲养至成螨后进行雌雄螨配对，根据不同需要将处于交配过程中不同时间的雌雄个体连同饲养装置一起放置于超低温冰箱（-80℃）或液氮中，从而获得不同交配时期的雌雄螨；

（2）乳酸浸泡：取出交配中的智利小植绥螨雌雄螨后，用细毛笔将雌雄螨放置到载玻片上，再用0号昆虫针和细毛笔将雌雄个体分开，最后将雌雄螨分别挑入到盛有乳酸的指形管中，常温放置3-4天；

（3）脱水：然后取出雌螨或雄螨或将两者一起放入70％的酒精中，再进行梯度脱水，酒精的浓度依次为80％、90％、100％，具体是操作是先用胶头滴管将上层酒精吸出，然后再加入下一梯度的酒精，如此循环直到100％的酒精；

（4）干燥：将所取雌螨、雄螨样品置于样品台上，利用真空干燥仪进行干燥2～3小时；

（5）生殖系统获取：经过干燥后的虫体在体视显微镜下可以清楚地看到在所取智利小植绥螨雌螨、雄螨样品周围部分呈透明色，只留下中间一块橙色的部位即为智利小植绥螨的生殖系统，最后在显微镜下用0号昆虫针将螨体的背板轻轻揭掉，取出橙色部分即成功分离出的智利小植绥螨生殖系统。

本发明首次提出一种获得智利小植绥螨雌螨或雄螨生殖系统的简易方法，应用本方法能够分别获得雌雄螨生殖系统，生殖系统的获得能为研究其生殖机理提供直接研究材料。

具体实施方式

实施例 智利小植绥螨精生殖系统获取方法

本方法是获得不同交配时期的智利小植绥螨后，经乳酸处理成功分离生殖系统的方法，交配中雌雄螨的获取、乳酸浸泡、脱水、干燥、生殖系统获取5部分，具体操作为：

（1）交配中雌雄螨的获取：在显微镜下，从智利小植绥螨饲养种群内，挑出智利小植绥螨的卵单独饲养至成螨后进行雌雄螨配对，根据不同需要将处于交配过程中不同时间的雌雄个体连同饲养装置一起放置于超低温冰箱（-80℃）或液氮中。从而获得不同交配时期的雌雄螨；

（2）乳酸浸泡：取出交配中的雌雄螨后，用细毛笔将雌雄螨放置到载玻片上，再用0号昆虫针和细毛笔将雌雄个体分开，将雌雄螨分别挑入到盛有乳酸的指形管中，常温放置3-4天。

（3）脱水：然后取出放入70％的酒精中，再进行梯度脱水，酒精的浓度依次为：80％，90％，100％。先用胶头滴管将上层酒精吸出，然后再加入下一梯度的酒精，如此循环直到100％的酒精；

（4）干燥：将样品置于样品台上，利用真空干燥仪进行干燥2～3小时；

（5）生殖系统获取：经过干燥后的虫体在体视显微镜下可以清楚地看到在螨体周围部分呈透明色，只留下中间一块橙色的部位即为智利小植绥螨的生殖系统。最后在显微镜下用0号昆虫针将螨体的背板轻轻接掉，取出橙色部分即成功分离出智利小植绥螨的生殖系统。