[发明专利]智利小植绥螨精子的获取及玻片标本制作方法

权利要求书

1.智利小植绥螨精子的获取及玻片标本制作方法，其特征是从正在交配中的智利小植绥螨雄螨颚体上获得精包后制作精子玻片标本的方法，包含交配中雌雄螨的获取、雌雄螨的定型、雌雄螨的分离、精包的获得、精子的获取及玻片标本制备5部分，所有操作除交配中的雌雄螨定型外均在显微镜下进行，具体操作为：

（1）交配中雌雄螨的获取：从智利小植绥螨饲养种群内，挑出智利小植绥螨的卵单独饲养至成螨后进行雌雄螨配对，配对10分钟左右雌雄螨即可交配，从而获得交配中雌雄螨；

（2）交配中雌雄螨的定型：在智利小植绥螨交配后0-120分钟内，将正处在交配过程中的雌雄个体连同饲养装置一起放置于-80℃超低温冰箱或液氮中3-5分钟，进行雌雄螨定型；

（3）定型后雌雄螨的分离：定型后将雌雄螨连同饲养装置一起取出，再用细毛笔从饲养装置中将交配的雌雄螨挑入载玻片上，再利用0号昆虫针和细毛笔等工具将交配的雌雄螨轻轻分开，防止破坏精包；

（4）精包的获得：雌雄螨成功分开后，利用手术刀将雄螨的鄂体切下来，保留颚体，在颚体上很容易观察到处于导精趾顶端的精包，然后用细毛笔尖将精包轻挑取下放入70%-100%酒精内保存或直接利用；

（5）精子的获取及玻片标本制备：用胶头滴管滴入一滴0.075mol/L的氯化钾溶液于载玻片的中央位置，然后用0号细毛笔将智利小植绥螨精包放置于载玻片上的氯化钾溶液中，常温下放置30分钟，再用移液枪或胶头滴管将氯化钾溶液吸走或将精包用细毛笔转移到新的载玻片上，用0号昆虫针或更细的针状工具将精包轻轻弄破，并快速往载玻片上滴入一滴新配置的固定液（甲醇：冰醋酸=3:1），固定30分钟，在此过程中至少补充滴加3次固定液（因为固定液挥发速度快），待固定液干燥后，往载玻片上滴入吉姆萨染液（原液1份，PH=7.2的磷酸缓冲液9份稀释），常温下染色60分钟，最后用清水将染液冲洗掉，经自然干燥或用吹风机吹干后，往载玻片上被染上色的位置上面滴入一滴优巴拉尔，然后盖上盖玻片，并用记号笔对染上色的部位进行圈注以方便观察，待样品固定好后在光学显微镜下即可观察智利小植绥螨雄螨精子。