[发明专利]用于降解烟叶中淀粉的XC-3菌株及其应用

说明书

本发明属于烟草微生物发酵技术领域，具体涉及一株用于降解烟叶中淀粉的苏云金芽孢杆菌XC‑3菌株及其在烟叶发酵中的应用。该菌株为苏云金芽孢杆菌 XC‑3，现保藏于武汉中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2017352。本发明通过特定菌株的筛选，设计了较为简便的菌剂处理烟叶的技术方案，使得本发明具有：工艺流程较为简便，烟叶处理成本较低，且处理周期较短，可明显降低烟叶中的淀粉含量等技术优点，因而在卷烟制造技术领域具有较好地推广应用价值。

技术领域

本发明属于烟草微生物发酵技术领域，具体涉及一株用于降解烟叶中淀粉的苏云金芽孢杆菌XC-3菌株及其在烟叶发酵方面的应用。

背景技术

淀粉是烟草生长过程中积累的重要碳水化合物，广泛存在于烟草的茎叶中，其含量的高低与烟叶品质密切相关。但是，淀粉含量过高对于烟草制品的抽吸品质是不利的，一方面会影响燃吸的速度和完全性，另一方面淀粉在燃烧时会产生焦糊气味以及多种有害成分，对烟草的色、香、味产生不良影响。一般认为，国外优质烟叶淀粉含量为l%~2%，而中国的为4%~6%，烤烟淀粉含量普遍偏高，已成为制约国内烟叶质量提高的重要因素之一。因此，利用合适的方法将烟叶中的淀粉降解成还原糖等小分子物质，是提高烟叶品质的有效途径之一。而单纯依赖烟草自身酶类的水解作用远不能满足卷烟工业对高品质烟叶原料的需求，如何利用生物技术降低烟叶中的淀粉含量，从而提高烟叶品质，已成为科技工作者普遍关注的问题。

生物法降解烟叶淀粉的研究主要为酶制剂法和微生物法，后者以其成本低廉、操作简单等优势成为研究热点，因此筛选特异性微生物应用于烟叶发酵，对有效降解烟叶中大分子物质、快速改善烟叶品质具有十分重要的现实意义。

发明内容

本发明目的在于提供了一株能够高效降解烟叶中淀粉物质的苏云金芽孢杆菌XC-3菌株，从而能够有效促进烟叶中大分子淀粉的降解，提高烟叶整体品质。

本申请所采取的详细技术方案如下。

一株用于降解烟叶中淀粉的XC-3菌株，该菌株为苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensi ），最初是由2013年河南许昌C2F烟叶中分离而来，其保藏名称为：苏云金芽孢杆菌 XC-3，分类学名称为Bacillus thuringiensi XC-3，已于2017年6月19日保藏于武汉中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏编号为CCTCC NO：M 2017352。

利用所述用于降解烟叶中淀粉的XC-3菌株所制备的菌剂，通过如下步骤制备而成：

（1）活化菌种，将XC-3菌株置于初筛固体培养基上，活化培养，具体而言：37℃条件下活化培养72 h；

（2）制备种子液，挑取步骤（1）中所培养的菌落，接种于液体种子培养基中，37℃摇床培养；

（3）扩大培养，将步骤（2）中种子液转接液体复筛培养基，培养至OD₆₀₀=1.8~2.0；

（4）制备菌剂，将步骤（3）中发酵液离心，弃上清，然后加入无菌水进行悬浮，调整活菌数为（9~10）×10⁷个/mL。

上述制备过程中，培养基成分单位以g/L计，

所述初筛固体培养基组成为：牛肉膏5.0，蛋白胨10.0，NaCl 5.0，可溶性淀粉20.0，琼脂粉15.0，pH 7.0～7.2；

所述液体种子培养基组成为：牛肉膏5.0，蛋白胨10.0，NaCl 5.0，pH 7.0～7.2；

所述液体复筛培养基组成为：可溶性淀粉20.0，豆粕粉20.0，pH 7.0～7.2。