[发明专利]一种基于蛋白互作用于检测细胞PD1表达情况的融合蛋白及其应用

说明书

本发明涉及一种基于蛋白互作用于检测细胞PD1表达情况的融合蛋白及其应用，属于生物检测技术领域。本发明融合蛋白，其特征在于由PDL1蛋白的结合区片段第18－132位氨基酸与GFP绿色荧光蛋白通过连接肽结合而得到。实验表明，本发明的融合蛋白既保证了PDL1与PD1的结合，又确保不会因为结合而引发程序性死亡。该融合蛋白用于PD1检测，与传统的抗体检测比较，具有效率高、成本低和更灵敏的优点，是一种快速、高效、精准的检测PD1的新方法。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种检测细胞PD1表达情况的融合蛋白及其应用。

背景技术

程序性死亡受体-1(programmed cell death protein-1，PD1/CD279)是重要的免疫检查点，通过与其两个配体PDL1(B7-H1/CD274)和PDL2(B7-DC/CD273)的作用而抑制T细胞的活化及细胞因子的产生，在维持机体的外周耐受上发挥至关重要的作用。

免疫检查点本是人体免疫系统中起保护作用的分子，起类似刹车的作用，防止T细胞过度激活导致的炎症损伤等。而肿瘤细胞利用人体免疫系统这一特性，通过过度表达免疫检查点分子，抑制人体免疫系统反应，逃脱人体免疫监视与杀伤，从而促进肿瘤细胞的生长。

目前临床上研究和应用最广泛的免疫检查点抑制剂包括CTLA-4、PD1和PDL1单抗，通过抑制免疫检查点活性，释放肿瘤微环境中的免疫刹车，重新激活T细胞对肿瘤的免疫应答效应，从而达到抗肿瘤的作用。

淋巴细胞上PD1的表达情况是临床检查、用药指导的重要标志物(biomarker)之一，目前市售的检测PD1的抗体有以下缺点：1.成本高，抗体的研发成本和生产成本较高；2.不灵敏，由于PD1抗体药物发展，高效灵敏的抗体，多用于开发治疗性药物；3.非特异结合，抗体本身易产生非特异结合，影响结果。4.检测结果难以统一，由于每个抗体的识别区不同，结合力不同，因此可能发生由于抗体不同而直接导致结果不同的现象发生。因此，急需开发稳定高效低廉的流式抗体替代品。

由于PDL1和PD1是天然存在的配体和受体，且以PDL1检测PD1能够最真实的反应可能受到免疫检查点影响的淋巴细胞的情况，但由于PDL1与PD1结合后，可以启动程序性死亡，因此简单的以PDL1作为检测PD1的方法尚不可行。

发明内容

针对上述领域中的缺陷，提供一种融合蛋白，该蛋白既保证了PDL1与PD1的结合，又确保不会因为结合而引发程序性死亡。

同时本发明还提供该融合蛋白在检测PD1表达情况中的应用。与传统的抗体检测比较，具有效率高、成本低和更灵敏的优点，是一种快速、高效、精准的检测PD1的新方法。

一种融合蛋白，其特征在于由PDL1蛋白的结合区片段第18－132位氨基酸与GFP绿色荧光蛋白通过连接肽结合而得到。

所述连接肽序列为：GGGGSGGGGSGGGGS、HHHHPGGSVKKR、SAPGTP、SAPGTPSR或PG。

所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。