[发明专利]一种麦芽寡糖基海藻糖合成酶突变体及其应用有效

申请号：	201710822065.8	申请日：	2017-09-13
公开（公告）号：	CN107488641B	公开（公告）日：	2019-11-26
发明（设计）人：	吴敬;宿玲恰;姚锴琳	申请（专利权）人：	江南大学
主分类号：	C12N9/10	分类号：	C12N9/10;C12N15/54;C12P19/12
代理公司：	23211 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司	代理人：	张勇<国际申请>=<国际公布>=<进入国
地址：	214122 江***	国省代码：	江苏;32
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摘要：
搜索关键词：	海藻糖合成酶麦芽寡糖突变体酶工程技术基因工程酶活应用
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【权利要求书】：

1.一种麦芽寡糖基海藻糖合成酶的突变体，其特征在于，将SEQ ID NO.1所示的麦芽寡糖基海藻糖合成酶第81位置的甘氨酸(Gly)变成丝氨酸(Ser)。

2.一种麦芽寡糖基海藻糖合成酶的突变体，其特征在于，将SEQ ID NO.1所示的麦芽寡糖基海藻糖合成酶第81位置的甘氨酸(Gly)变成丝氨酸(Ser)、将第284位置的苯丙氨酸(Phe)变成缬氨酸(Val)并将第615位置的丝氨酸(Ser)变成甘氨酸(Gly)。

3.一种麦芽寡糖基海藻糖合成酶的突变体，其特征在于，将SEQ ID NO.1所示的麦芽寡糖基海藻糖合成酶第81位置的甘氨酸(Gly)变成丝氨酸(Ser)、将第284位置的苯丙氨酸(Phe)变成缬氨酸(Val)并将第439位置的苏氨酸(Thr)变成丙氨酸(Ala)、将第615位置的丝氨酸(Ser)变成甘氨酸(Gly)。

4.一种麦芽寡糖基海藻糖合成酶的突变体，其特征在于，将SEQ ID NO.1所示的麦芽寡糖基海藻糖合成酶第81位置的甘氨酸(Gly)变成丝氨酸(Ser)、将第284位置的苯丙氨酸(Phe)变成缬氨酸(Val)、将第586位置的甘氨酸(Gly)变成天冬氨酸(Asp)并将第615位置的丝氨酸(Ser)变成甘氨酸(Gly)。

5.编码权利要求1～4任一所述突变体的基因。

6.携带权利要求5所述基因的载体或重组细胞。

7.制备权利要求1～4所述突变体的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)根据确定的突变位点，设计定点突变的突变引物，以携带麦芽寡糖基海藻糖合成酶基因的载体为模板进行定点突变；构建含有编码突变体的基因的质粒载体；

(2)将突变体质粒转化进宿主细胞；

(3)挑选阳性克隆进行发酵培养，离心收集细胞，细胞破壁上清液即为麦芽寡糖基海藻糖合成酶突变体的粗酶液。

8.权利要求1～4任一所述突变体在生产海藻糖中的应用。

9.权利要求5所述基因在生产海藻糖中的应用。

10.权利要求6所述载体或重组细胞在生产海藻糖中的应用。

11.生产海藻糖的酶制剂，其特征在于，包括权利要求1～4任一所述突变体。

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