[发明专利]一种丝状真菌的筛选培养基及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种丝状真菌的筛选培养基，其特征在于：包括自下而上依次设置的显色培养基、酶解培养基和营养培养基；所述显色培养基含有琼脂糖和钙离子指示剂，所述酶解培养基含有琼脂糖和植酸钙。

2.如权利要求1所述的丝状真菌的筛选培养基，其特征在于：所述显色培养基的制备原料含有：

(a)钙离子指示剂溶液，由钙离子指示剂和缓冲溶液组成，钙离子指示剂的质量与缓冲溶液的体积的比为0.1～2g：100mL；和

(b)琼脂糖溶液，由琼脂糖和缓冲溶液组成，琼脂糖的质量与缓冲溶液的体积的比为0.2～1.0g：100mL；

所述(a)与(b)的体积比为1～10：100。

3.如权利要求2所述的丝状真菌的筛选培养基，其特征在于：所述钙离子指示剂为铬黑T。

4.如权利要求1所述的丝状真菌的筛选培养基，其特征在于：所述酶解培养基的制备原料含有：

(c)植酸钙悬浮液，所述植酸钙悬浮液中植酸钙的含量为0.02-0.2g/mL；和

(b)琼脂糖溶液，由琼脂糖和缓冲溶液组成，琼脂糖的质量与缓冲溶液的体积的比为0.2～1.0g：100mL；

所述(c)与(b)的体积比为1：10。

5.如权利要求2～4任一项所述的丝状真菌的筛选培养基，其特征在于：所述缓冲溶液为Tris-HCl缓冲液，所述缓冲液的pH值为7.1-8.9。

6.如权利要求1所述的丝状真菌的筛选培养基，其特征在于：所述营养培养基含有无机盐和下述含量的组分：

7.如权利要求6所述的丝状真菌的筛选培养基，其特征在于：所述无机盐包括硝酸钾、硫酸铵、氯化钠和氯化镁；所述营养培养基中，2-脱氧葡萄糖的浓度为5-30mmol/L，植酸钙的含量为0.3-0.6％w/v。

8.如权利要求1所述的丝状真菌的筛选培养基，其特征在于：所述显色培养基的厚度为所述筛选培养基厚度的1/6-1/3；所述酶解培养基的厚度为所述筛选培养基厚度的1/4-1/3；所述营养培养基的厚度为所述筛选培养基厚度的1/3-7/12。

9.一种如权利要求1～8任一项所述丝状真菌的筛选培养基的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

显色培养基的制备：按照每100mL缓冲溶液加入0.1～2g钙离子指示剂的比例，将钙离子指示剂溶解于缓冲溶液中，过滤除菌，得到钙离子指示剂溶液；按照每100mL缓冲溶液加入0.2～1.0g琼脂糖的比例，将琼脂糖溶解于缓冲溶液中，灭菌后冷却，再加入制得的钙离子指示剂溶液，摇匀后倒板，得到显色培养基；

酶解培养基的制备：将植酸钙加入水中，浸泡过夜后，灭菌，冷却至室温，离心弃上清，得到植酸钙沉淀，加入水分散植酸钙沉淀，得到植酸钙悬浮液；按照每100mL缓冲溶液加入0.2～1.0g琼脂糖的比例，将琼脂糖溶解于缓冲溶液中，灭菌后冷却，再加入制得的植酸钙悬浮液，摇匀后倒板，得到酶解培养基；

营养培养基的制备：将植酸钙溶解于水中，边搅拌边加入乳酸，得到混合溶液A；将2-脱氧葡萄糖溶解于水中，过滤后除菌，得到2-脱氧葡萄糖水溶液；将硝酸钾和氯化镁溶于水中，过滤除菌，得到混合溶液B；向混合溶液A中加入木糖、氯化钠和硫酸铵，定量、搅拌均匀，调节pH值后再加入琼脂糖，灭菌，冷却，得到混合溶液C；向混合溶液C中加入2-脱氧葡萄糖水溶液和混合溶液B，摇匀后倒板，得到营养培养基；

将酶解培养基加至冷却后的显色培养基上，得到预筛选培养基；

待酶解培养基冷却后，将营养培养基加至预筛选培养基中的酶解培养基上，得到所述丝状真菌的筛选培养基。

10.如权利要求1～8任一项所述丝状真菌的筛选培养基在筛选丝状真菌中的应用。