[发明专利]nAChR-α1-ECD蛋白在医疗检测中的应用

说明书

本发明提供了一种nAChR‑α1‑ECD蛋白在医疗检测中的应用，其特征在于，该蛋白的氨基酸系列为SEQ ID 1，其中，该蛋白的分子量为28.7kDa，等电点为6.0。并且还进一步提供了使用该nAChR‑α1‑ECD蛋白通过ELISA间接法、WB蛋白免疫印迹法检测患者血清中是否存在nAChR‑Ab或进一步检测其浓度的具体方法。由于使用的是大肠杆菌表达的nAChR‑α1‑ECD蛋白，成分明确，纯度高，检测结果可靠重复性好。同时由于该蛋白是人工制备的，检测成本低。

技术领域

本发明涉及nAChR-α1-ECD蛋白在医疗检测中的应用，属于生物化学领域。

背景技术

上海长海医院神经内科1978年开始开展重症肌无力(MG)临床试验研究，曾采用电鳐及人类肌肉提取nAChR抗原，检测重症肌无力nAChR抗体(nAChR-Ab)。该方法因取材日益受限不得已停用。

然而，目前市场上还没有人体AChR-Ab的临床检测试剂盒销售，沿用老办法继续使用动物或人体肌肉提取，操作复杂、成本高，而且也无法满足现实中大量病患检测的需求。而直接根据人体nAChR的氨基酸序列人工合成后进行基因表达，虽然能得到目标蛋白，但往往因为目标蛋白的性质原因而难以分离或者分离的纯度不高、收率低。

发明内容

本发明是为了解决上述问题而进行的，目的在于提供一种nAChR-α1-ECD蛋白及其制备方法和该蛋白在医疗检测中的应用。

本发明提供了一种nAChR-α1-ECD蛋白在医疗检测中的应用，其特征在于，该蛋白的氨基酸系列为SEQ ID 1，其中，该蛋白的分子量为28.7kDa，等电点为6.0。

本发明提供的nAChR-α1-ECD蛋白在医疗检测中的应用，还可以具有这样的特征，其特征在于：医疗检测中的应用是检测患者血清中是否存在nAChR-Ab或进一步检测其浓度。

本发明提供的nAChR-α1-ECD蛋白在医疗检测中的应用，还可以具有这样的特征，其特征在于，具体包括以下步骤：

步骤一，将nAChR-α1-ECD蛋白用10％SDS-PAGE进行蛋白质电泳，经转膜获得结合有nAChR-α1-ECD蛋白的蛋白膜；

步骤二，将待测血清用5％BSA浓度的PBST封闭液以1:500～1:2000的倍率稀释，与制备的蛋白膜低温孵育；

步骤三，使用0.2％的PBST溶液洗膜，用抗人IgG二抗与步骤二中的蛋白膜室温孵育；

步骤四，洗膜后ECL显影或直接用蛋白膜扫描仪扫描，分析28.7kDa条带的强度，与阴性对照比较，判断待测血清是否为抗nAChR抗体阳性。

本发明提供的nAChR-α1-ECD蛋白在医疗检测中的应用，还可以具有这样的特征，其特征在于：其中，步骤二中的稀释倍率为1：1000。

本发明提供的nAChR-α1-ECD蛋白在医疗检测中的应用，还可以具有这样的特征，其特征在于：其中，步骤二中的蛋白膜低温孵育的温度为0-4℃。

本发明提供的nAChR-α1-ECD蛋白在医疗检测中的应用，还可以具有这样的特征，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一，将nAChR-α1-ECD蛋白用PBS稀释为5μg/mL包被96孔板，每孔100μL包被，低温静置；

步骤二，弃去抗原包被液，用PBST充分洗涤包被板各孔3次，每次洗涤后倒扣于吸水纸上拍干；

步骤三，非特异性位点封闭，每孔加入200μL 1％BSA浓度的PBST封闭液，37℃孵育1小时；

步骤四，第一次洗板，弃去每孔中的封闭液，用PBST充分洗涤各孔多次，每次洗涤后倒扣于吸水纸上拍干；