[发明专利]用于鉴定豌豆品种和纯度的核心SSR引物及试剂盒

说明书

本发明公开了12对用于鉴定豌豆品种和纯度的核心SSR引物，分别为引物PEA‑1～PEA‑12，引物序列如SEQ ID NO:1‑24所示。利用本发明的12对核心SSR引物，进行PCR扩增，并结合荧光PCR毛细管电泳检测技术，可在短时间内完成豌豆品种纯度鉴定工作，具有高效、准确、方便、鉴定结果不易受环境影响等优点。本发明可以从DNA水平对豌豆品种纯度进行有效监控、保护作物品种，防止假冒伪劣品种进入市场，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及分子生物学和作物育种技术领域，具体地说，涉及用于鉴定豌豆品种和纯度的核心SSR引物及试剂盒。

背景技术

豌豆是世界上第四大食用豆类作物，也是我国主要的杂粮作物之一。豌豆具有高蛋白质含量、维生素丰富、易消化吸收，粮、菜、饲、肥兼用等诸多特点。豌豆种子质量直接影响产量，豌豆种子纯度是衡量种子质量好坏的重要指标。随着我国种业市场的不断壮大，市场上出现了一些以次充好、掺假造假等违规现象，严重影响了种植户的利益和种业市场的健康发展。因此，建立一套高效、精准、高通量、自动化的豌豆品种纯度检测体系显得尤为重要。

目前我国对豌豆品种纯度鉴定主要依据NY/T 2436-2013《植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南豌豆》，该方法简便、经济，但受限于许多形态学性状鉴定周期长、易受环境影响等因素。近年来，随着生物技术的飞速发展，DNA分子标记技术已经成为鉴定作物品种纯度、解决品种争议和新品种授权和保护的重要依据，也是促进农作物产业体系健康发展的有效手段。简单重复序列(Simple sequence repeat，SSR)，是第二代基于PCR技术的分子标记技术，具有多态性丰富、遗传信息多、操作便利、共显性、高度可重复性等优点，已被广泛应用于植物资源遗传研究和分子辅助育种实践中。SSR分子标记能够从DNA水平上鉴定出品种间或品种内的遗传差异，在品种纯度及真实性鉴定、种子质量标准化、品种审定及产权登记保护、品种纠纷等方面具有重要应用价值。

豌豆品种科豌6号是辽宁省经济作物研究所于2005年以韩国超级甜豌豆为母本，辽豌4号为父本定向筛选育成，具有早熟、优质和增产优势显著等特点。豌豆品种中秦1号是中国农科院农作物研究所与秦皇岛市经济作物管理总站合作，于2011年以豌豆种质资源“早绿”为亲本，经EMS化学诱变处理，定向筛选育成，具有抗逆性强、早熟、高产、食味鲜美，尤适菜用等特点。

发明内容

本发明的目的是提供用于鉴定豌豆品种和纯度的核心SSR引物及试剂盒。

本发明的另一目的是提供上述核心SSR引物及试剂盒在快速鉴定豌豆品种和纯度中的应用。

为了实现本发明目的，本发明提供的用于鉴定豌豆品种和纯度的核心SSR引物，包括12对核心SSR引物，分别对应于表1中PEA-1～PEA-12，引物信息如下(SEQ ID NO:1-24)：

表1 12对核心SSR引物信息

本发明还提供含有所述12对核心SSR引物的检测试剂或试剂盒。

本发明还提供一种鉴定豌豆品种的方法，利用上述核心SSR引物，或检测试剂或试剂盒进行检测。

所述方法包括以下步骤：

1)提取待测豌豆的基因组DNA；

2)以提取的DNA为模板，分别利用每对核心SSR引物进行PCR扩增；

3)分析PCR扩增产物。

前述的方法，进行PCR扩增前，还包括对每对核心SSR引物进行荧光标记的步骤，例如，在引物对PEA-1～PEA-5、PEA-7的上游引物5′端标记FAM荧光基团，在PEA-8～PEA-12、PEA-6的上游引物5′端标记HEX荧光基团。