[发明专利]靶向人源化mesothelin的嵌合抗原受体的方法和用途

权利要求书

1.一种多核苷酸序列，所述多核苷酸序列选自：

(1)含有依次连接的抗间皮素单链抗体的编码序列、人CD8α铰链区的编码序列、人CD8跨膜区的编码序列、人CD28胞内区的编码序列、人41BB胞内区的编码序列、人CD3ζ胞内区的编码序列、任选的EGFR的含胞外结构域III和胞外结构域IV的片段的编码序列；和

(2)(1)所述多核苷酸序列的互补序列。

2.如权利要求1所述的多核苷酸序列，其特征在于，

所述多核苷酸序列在所述抗间皮素单链抗体的编码序列前还含有信号肽的编码序列，优选地，所述信号肽的多核苷酸序列如SEQ ID NO:1第1-63位多核苷酸所示；和/或

所述抗间皮素单链抗体的多核苷酸序列如SEQ ID NO:1第64-792位多核苷酸所示；和/或

所述人CD8α铰链区和CD8跨膜区的多核苷酸序列如SEQ ID NO:1第793-999位多核苷酸所示；和/或

所述人CD28胞内区的多核苷酸序列如SEQ ID NO:1第1000-1122位多核苷酸所示；和/或

所述人41BB胞内区的多核苷酸序列如SEQ ID NO:1第1123-1266位多核苷酸所示；和/或

所述人CD3ζ胞内区的多核苷酸序列如SEQ ID NO:1第1267-1599位多核苷酸所示；和/或

所述EGFR的片段含有EGFR的胞外结构域III、胞外结构域IV以及跨膜区，或由EGFR的胞外结构域III、胞外结构域IV以及跨膜区组成；优选地，所述片段含有人EGFR的第310-646位多核苷酸序列，或由人EGFR的第310-646位多核苷酸序列组成；更优选地，所述片段的多核苷酸序列如SEQ ID NO:1第1758-2751位多核苷酸所示。

3.一种融合蛋白，所述融合蛋白选自：

(1)含有依次连接的抗间皮素单链抗体、人CD8α铰链区、人CD8跨膜区、人CD28胞内区、人41BB胞内区和人CD3ζ胞内区的融合蛋白、任选的EGFR的含胞外结构域III和胞外结构域IV的片段的编码序列；和

(2)在(1)限定的氨基酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且保留活化T细胞活性的由(1)衍生的融合蛋白；

优选地，所述抗间皮素单克隆抗体为M912。

4.如权利要求3所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白具有以下一个或多个特征：

所述融合蛋白在所述抗间皮素单链抗体的N端还含有信号肽，优选地，所述信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第1-21位氨基酸所示；

所述抗间皮素单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第22-264位氨基酸所示；

所述人CD8α铰链区和CD8跨膜区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第265-333位氨基酸所示；

所述人CD28胞内区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第334-375位氨基酸所示；

所述人41BB胞内区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第376-422位氨基酸所示；

所述人CD3ζ胞内区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第423-533位氨基酸所示；和

所述EGFR的片段含有EGFR的胞外结构域III、胞外结构域IV以及跨膜区，或由EGFR的胞外结构域III、胞外结构域IV以及跨膜区组成；优选地，所述片段含有人EGFR的第310-646位氨基酸序列，或由人EGFR的第310-646位氨基酸序列组成；更优选地，所述片段的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第582-916位氨基酸所示。

5.一种核酸构建物，所述核酸构建物含有权利要求1-2中任一项所述的多核苷酸序列；

优选地，所述核酸构建物为载体；

更优选地，所述核酸构建物为逆转录病毒载体，含有复制起始位点，3’LTR，5’LTR，pis包装信号，酶切位点，土拨鼠肝炎病毒转录后调节元件，以及权利要求1-2中任一项所述的多核苷酸序列。

6.一种逆转录病毒，所述逆转录病毒含有权利要求5所述的核酸构建物，优选含有所述载体，更优选含有所述逆转录病毒载体。