[发明专利]一种抗凝血女贞花多糖及其提取分离方法和应用

说明书

本发明属于植物提取技术领域，具体涉及一种抗凝血女贞花多糖及其提取分离方法和应用。该提取分离方法是将女贞花经脱脂、水提醇沉获得粗多糖，然后将除蛋白、脱色后的粗多糖用DEAE‑52纤维素色谱柱、Sephadex G‑100凝胶色谱柱进一步纯化而得。本发明对该多糖的体外凝血效果进行考察，结果表明该多糖有良好的抗凝血作用，可用于制备抗凝血药物。

技术领域

本发明属于植物提取技术领域，具体涉及一种促凝血女贞花多糖及其提取分离方法、应用。

背景技术

女贞Ligustrum lucidum Ait.为木犀科女贞属植物，产于长江以南至华南、西南各省区，向西北分布至陕西、甘肃。朝鲜也有分布，印度、尼泊尔有栽培。其干燥果实为女贞子，有滋肝补肾、乌发明目的功效。目前，国内外一些研究者对女贞子的炮制方法、药理作用、化学成分等有深入的研究，化学研究表明其含有多糖类、有机酸、萜类、甾体类和黄酮类等活性成分，具有抗炎、降血糖、提高机体免疫力和保肝等作用，而对女贞花的研究则仅限于提取工艺、挥发油、黄酮类、萜类等，而关于女贞花多糖的研究未见报道，因此这不仅是在多糖领域的进步，同时也为女贞花的进一步开发利用提供了广阔的前景。

凝血实质上是水溶性的纤维蛋白原转变为水不溶性的固态纤维蛋白的过程，是在内源性或（和）外源性凝血途径下产生凝血酶原激活物，在凝血因子的作用下产生凝血酶，最后在凝血酶的作用下使纤维蛋白原转变为纤维蛋白。血浆凝血酶原时间（PT）主要反映的是外源性凝血途径中凝血因子I、II、V、VII、X的活性；部分活化凝血活酶时间（APTT）主要反映内源性凝血系统状况，与VIII、X、XI、XII等内源性凝血因子活性有关；凝血酶时间（TT）值是主要反映纤维蛋白原转变为纤维蛋白程度的重要指标；血浆纤维蛋白原（FIB）主要反映纤维蛋白原的含量。

抗凝血药可用于防治血管内栓塞或血栓形成的疾病，预防中风或其它血栓性疾病，是通过影响凝血过程中的某些凝血因子阻止凝血过程的药物。正常人由于有完整的血液凝固系统和抗凝及纤溶系统，所以血液在血管内既不凝固也不出血，始终自由流动完成其功能，但当机体处于高凝状态或抗凝及纤溶减弱时，则发生血栓栓塞性疾病。血栓的形成常常会引起血管系统的局部血液凝固，通常导致严重损害健康的相关疾病，如心脏病发作、中风。引起血栓形成的危险因素由异常高脂血症、高血糖症、血浆纤维蛋白原升高、血压升高和癌症等，这些血栓性疾病已成为死亡的主要原因，因此迫切需要有效的抗凝血药物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从女贞花中提取分离得到具有抗凝血作用的女贞花多糖，同时提供了该女贞花多糖的提取分离方法及应用。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种抗凝血女贞花多糖的提取分离方法，其包括以下步骤：

（1）新鲜的女贞花，阴干、粉碎，用石油醚回流脱脂，残渣挥干石油醚后，用乙醇浸提，所得残渣挥发至无醇味，用超纯水加热提取，趁热抽滤，合并滤液后减压浓缩至原体积的1/4左右，再向浓缩液中加入乙醇，静置、离心，得到的沉淀加超纯水溶解透析以除去小分子杂质，透析液进行醇沉，得到的多糖沉淀冷冻干燥即得女贞花粗多糖；

（2）取除蛋白、脱色后的女贞花粗多糖，用超纯水溶解、过滤后加入到DEAE-52纤维素色谱柱，依次用超纯水、0.1 mol/L、0.2 mol/L、0.3 mol/L 的NaCl溶液进行洗脱，洗脱液采用苯酚-硫酸法进行检测，测490 nm处的吸光度，以洗脱管数为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制洗脱曲线，合并同一洗脱峰的多糖样品，透析、浓缩后冷冻干燥；其中，0.1 mol/L NaCl溶液的洗脱峰为组分LL-1，0.2 mol/L NaCl溶液的洗脱峰为组分LL-2，0.3 mol/L NaCl溶液的洗脱峰为组分LL-3；