[发明专利]一种加拿大糖槭组织培养快繁的方法

权利要求书

1.一种加拿大糖槭组织培养快繁的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)外植体选择

选取多年生健壮、无病虫害的加拿大糖槭，以其当年生、未木质化的嫩枝作为外植体；

(2)外植体预处理

将步骤(1)中的外植体除去叶片、叶柄，75％酒精擦拭后，修剪成至少带一个腋芽或顶芽的茎段，然后用洗洁精震荡清洗；接着将茎段浸泡在纯水中并置于温度为18-22℃下的超声波清洗器中处理，之后用纯水冲洗；

(3)无菌体系的建立

将经步骤(2)处理后外植体在无菌操作台中用75％酒精浸泡消毒，用无菌水冲洗，用0.1％氯化汞震荡消毒，用无菌水冲洗，吸干，再切除茎段两端消毒死亡部分后获得无菌材料；

(4)诱导培养

在MS培养基的基础上添加6-BA0.5mg/L，蔗糖30g，琼脂6.5g，配置诱导培养基，调节诱导培养基pH至5.8；将步骤(3)无菌材料形态学下端插入诱导培养基中进行芽的分化诱导培养，促进芽的萌发和生长；

(5)增殖培养

在MS培养基的基础上添加6-BA0.5mg/L，GA₃ 0.5mg/L，蔗糖30g，琼脂6.5g，配置继代培养基，调节继代培养基pH至5.8，将步骤(4)中的加拿大糖槭腋芽整个接入继代培养基进行增殖培养；

(6)根的诱导

在MS培养基的基础上添加IBA0.5mg/L，蔗糖20g，琼脂6.5g，配置生根培养基，调节生根培养基pH至5.8，将步骤(5)的幼苗接入生根培养基进行生根诱导；

(7)无菌苗的炼苗驯化

将步骤(6)的加拿大糖槭生根无菌苗从培养室移至温室大棚培养，然后移入轻基质中继续培育成完整的再生植株；其中轻基质由营养土、河沙和珍珠岩以2∶1∶1的体积比混合并用高锰酸钾消毒制成。

2.根据权利要求1所述的一种加拿大糖槭组织培养快繁的方法，其特征在于：步骤(1)进行外植体时间为4中旬至6月中旬。

3.根据权利要求1所述的一种加拿大糖槭组织培养快繁的方法，其特征在于：步骤(2)具体步骤为：将步骤(1)中的外植体在不损伤腋芽和顶芽的基础上除去叶片、叶柄，用纱布蘸取75％酒精擦拭1-2遍后，再修剪成3-5cm至少带一个腋芽或顶芽的茎段，用洗洁精震荡清洗2遍后，流水清洗8-10分钟，接着将茎段浸泡在装有纯水的容器中并置于温度为18-22℃下的超声波清洗器中处理8-12分钟，之后用纯水冲洗1-2遍。

4.根据权利要求1所述的一种加拿大糖槭组织培养快繁的方法，其特征在于：步骤(3)的具体步骤为：将步骤(2)处理后外植体在无菌操作台中用75％酒精浸泡20-40秒进行表面消毒，用无菌水冲洗1-2次，用0.1％氯化汞震荡浸泡消毒2-3分钟，用无菌水冲洗4-6次，吸干，再切除茎段两端消毒死亡部分后获得无菌材料。

5.根据权利要求1所述的一种加拿大糖槭组织培养快繁的方法，其特征在于：所述步骤(4)中芽的分化诱导控制培养温度在24-26℃，光照时间12-14h/d，光照强度为2000-2500lx，光照培养20-30d。

6.根据权利要求1所述的一种加拿大糖槭组织培养快繁的方法，其特征在于：所述步骤(5)中壮苗培养温度在24-26℃，光照时间12-14h/d，光照强度为2000-2500lx，培养20-30d。

7.根据权利要求1所述的一种加拿大糖槭组织培养快繁的方法，其特征在于：所述步骤(6)中根的培养温度20-25℃，光照时间10-16h/d，光照强度为2000-2500lx，培养15-20d。