[发明专利]一种黑骨藤指纹图谱的建立方法

权利要求书

1.一种黑骨藤指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：

(1)对照品溶液的制备：称取杠柳毒苷对照品8.00～8.50mg，置于10mL容量瓶中，加入甲醇，使其充分溶解，摇匀，用甲醇定容，配制成质量浓度为0.80～0.85mg·mL^-1的对照品溶液；

(2)供试品溶液的制备：称取黑骨藤样品1.5～2.5g,按料液比1:20～1:30加入65％～75％乙醇溶液45～55mL，加热回流提取2～4次，每次50～70min；提取液于70℃水浴蒸干，加20～30mL蒸馏水使成混悬液；分别依次用和混悬液等量的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取2～4次，取正丁醇萃取部位，浓缩至干，残渣用适量甲醇溶解，转移并定容置于10mL容量瓶中，摇匀，0.40～0.50μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液；

(3)色谱条件：色谱柱：Xtimate C₁₈(250mm×4.6mm,5μm)；检测波长：200～240nm；柱温：20～30℃；进样量：10μL；流动相：乙腈-0.05％～0.15％磷酸水溶液，梯度洗脱，流速：0.8～1.2mL·min^-1；

(4)指纹图谱的制作：按上述方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下进样，记录谱图得到黑骨藤指纹图谱；

(5)指纹谱图的确认：按照上述提供的方法，对多批次黑骨藤建立了指纹图谱，通过分析比较确定了16个共有峰，这些共有峰构成了黑骨藤的指纹特征，作为黑骨藤的指纹图谱。

2.如权利要求1所述的黑骨藤指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述供试品溶液这样制备：称取黑骨藤样品2.0g，按料液比1:25加入70％乙醇溶液50mL，加热回流提取3次，每次60min；提取液于70℃水浴蒸干，加25mL蒸馏水使成混悬液；分别依次用等量的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，取正丁醇萃取部位，浓缩至干，残渣用适量甲醇溶解，转移并定容置于10mL容量瓶中，0.45μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。

3.如权利要求1所述的黑骨藤指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述梯度洗脱是；按下表梯度程序进行梯度洗脱：

4.如权利要求1所述的黑骨藤指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述16个共有峰，以14号峰(杠柳毒苷)为参照峰，其余峰相对保留时间分别为0.0848～0.0849，0.2027～0.2034，0.2811～0.2815，0.3068～0.3080，0.4248～0.4259，0.5747～0.5760，0.7122～0.7148，0.8173～0.8189，0.8362～0.8376，0.8876～0.8881，0.9099～0.9109，0.9366～0.9371，0.9844～0.9846，1.0000～1.0121，1.2837～1.2848。

5.如权利要求1所述的黑骨藤指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述色谱柱：Xtimate C₁₈(250mm×4.6mm,5μm)；检测波长：220nm；流速：1.0mL·min^-1；柱温：25℃；进样量：10μL；流动相：乙腈(A)-0.1％磷酸水溶液(B)，梯度洗脱。