[发明专利]一种利用双水相体系萃取木瓜蛋白酶的方法

权利要求书

1.一种利用双水相体系萃取木瓜蛋白酶的方法，其特征在于，按照下述步骤进行：

(1)聚合物/无机盐双水相体系的配制，配制一定浓度的无机盐溶液，一定浓度的离子液体溶液以及一定浓度的蛋白酶溶液，配制完成后，按照一定的质量比例组成，逐步加入到离心管中；

(2)体系组分均加入完毕以后，放在涡旋震荡器上震荡5min，保证无机盐完全溶解以及整个体系的均匀混合；震荡结束后放在25℃的恒温水浴锅中静置24h，待体系分相完成；

(3)分相完成后，分别取上相和下相溶液进行蛋白酶含量的测定，通过紫外分光光度计扫描蛋白酶的最大吸收波长，得到最大吸收波长为278nm，通过标准曲线计算出上相中蛋白酶的萃取率，即可达到萃取木瓜蛋白酶的目的；

所述步骤(1)中双水相体系成相聚合物为分子量为400的聚乙二醇(PEG400)；

所述步骤(1)中双水相体系成相无机盐为二水合磷酸二氢钠(NaH₂PO₄-2H₂O)，无机盐溶液质量浓度为60wt％；

所述步骤(1)中用作辅助聚合物/无机盐双水相体系中的离子液体为1-乙基-3-甲基咪唑氯盐([C₂mim]Cl)，1-丁基-3-甲基咪唑氯盐([C₄mim]Cl)，1-己基-3-甲基咪唑氯盐([C₆mim]Cl)，1-辛基-3-甲基咪唑氯盐([C₈mim]Cl)或1-丁基-3-甲基咪唑醋酸盐([C₄mim]OAC)中的一种，所配置离子液体浓度为40wt％；所述步骤(1)中聚合物/无机盐双水相体系中所用的蛋白酶为木瓜蛋白酶，所配置的木瓜蛋白酶浓度为10mg/ml，加入10ml离心管中蛋白酶的体积为1ml；

所述步骤(1)中聚合物/无机盐双水相体系组成为20wt％PEG400+24wt％NaH₂PO₄-2H₂O+4wt％IL。