[发明专利]小鼠Shank 3基因cRNA探针及原位杂交显色方法

权利要求书

1.一种小鼠Shank 3基因cRNA探针，其特征在于：该cRNA探针的序列如SEQ.ID.NO.3所示。

2.根据权利要求1所述一种小鼠Shank 3基因cRNA探针，其特征在于：所述cRNA探针是以小鼠脑组织cDNA为模板，并使用以下引物扩增得到的：

上游引物：5’-ACCCGAGACTCTGAGAGAGG-3’；

下游引物：5’-AATGGTGCTTGTGGTCTCCA-3’。

3.根据权利要求1所述一种小鼠Shank 3基因cRNA探针，其特征在于：所述cRNA探针上标记有地高辛。

4.一种小鼠Shank 3基因原位杂交显色方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)制备用于原位杂交的小鼠脑组织标本；

2)将小鼠脑组织标本依次经过杂交前处理、杂交预处理后置于杂交液中进行原位杂交；所述原位杂交中采用的杂交液由杂交预处理中使用的预杂交液和小鼠Shank 3基因cRNA探针组成，所述cRNA探针的序列如SEQ.ID.NO.3所示；该cRNA探针上标记有地高辛；

3)杂交完成后依次进行漂洗、封闭，然后利用针对地高辛的抗体对结合在小鼠脑组织标本上的cRNA探针进行识别；然后利用TSA-biotin对结合在小鼠脑组织标本上的cRNA探针进行放大处理，然后进行荧光显色；TSA-biotin由0.05g BSA、5μL tyramide-biotin、15μL的1.0mg/mL葡萄糖氧化酶、50μL的200mg/mLβ-D-葡萄糖以及5mL0.1 M PB组成；放大处理的条件为：经TNT以及0.1M PB漂洗后，于TSA-biotin中避光孵育20-40分钟。

5.根据权利要求4所述一种小鼠Shank 3基因原位杂交显色方法，其特征在于：所述杂交前处理中，将小鼠脑组织标本依次置于以下液体中进行处理：含体积分数1-3％H₂O₂的0.1M DEPC-PB中避光孵育10-20分钟；0.1M DEPC-PB中漂洗10-20分钟；含体积分数0.3％Triton X-100的0.1M DEPC-PB中孵育20-30分钟；含体积分数0.25％乙酸酐的0.1M三乙醇胺中孵育10-20分钟；0.1M DEPC-PB中漂洗1-3次，每次10-20分钟。

6.根据权利要求4所述一种小鼠Shank 3基因原位杂交显色方法，其特征在于：所述杂交预处理的条件为：于预杂交液中55-60℃孵育1-2小时；所述预杂交液由0.5mL的去离子甲酰胺、0.25mL的20×SSC、0.2mL的10％的封闭剂、0.01mL的10％SDS，以及0.05mL的2％的NLS组成。

7.根据权利要求4所述一种小鼠Shank 3基因原位杂交显色方法，其特征在于：所述原位杂交的条件为：于杂交液中55-60℃孵育16-20小时，所述杂交液中cRNA探针的浓度为1-2μg/mL。