[发明专利]一种检测中华鳖IGFBP1基因片段中与生长相关单核苷酸位点的试剂盒及应用

说明书

本发明属于水生动物分子生物学技术领域，具体涉及中华鳖IGFBP1基因与生长相关单核苷酸位点的发现与应用。IGFBP1基因的多态性是根据中华鳖基因组中IGFBP1基因序列设计引物，以中华鳖的基因组DNA为模板扩增，扩增片段利用直接测序法筛选SNP，并利用ARMS PCR进行基因分型，发现第243bp处有一个A/G的碱基突变，利用该标记与大样本中华鳖群体的生长性状进行关联分析，并检测其在不同品系鳖中的情况。本发明为中华鳖标记辅助选择提供了新的分子标记。

技术领域

本发明属于水生动物分子生物学技术领域，涉及一种包含如SEQ ID NO：1所示中华鳖基因核苷酸的核酸分子。本发明还涉及IGFBP1基因多核苷酸序列中的单核苷酸多态性位点和检测所述单核苷酸多态性位点的方法，以及该位点和中华鳖生长性状的关联分析。

背景技术

动物的生长性状由于直接影响着水产动物的经济价值，已作为一个重要的经济性状成为当前研究的热点。提高生长速度可以直接降低养殖和劳动力投入，有利于经济效益的提高。因此，筛选具有优良生长性状的养殖品种，提高水产动物的生长性能，是水产养殖业长久以来的研究目标。传统的选育方法是依表型进行选择，周期长，效率低，因此需利用分子标记技术从基因型层面，筛选与经济性状相关分子标记，辅助选育，以提高育种效率。目前，比较直接快速的解决办法之一就是利用分子标记的方法筛选到与这些生长性状相关的基因或标记，从而进行遗传改良。

胰岛素样生长因子(Insulin-iike growth factors,IGFs)是一类具有胰岛素样代谢和促有丝分裂功能的蛋白质，是胚胎和动物出生后生长的主要决定因素。IGF介导生长激素的促生长作用。神经内分泌生长轴上的IGF系统包括两个配体(IGF-I、IGF-II)、两个IGF受体(IGF-IR、IGF-IIR)以及IGF结合蛋白(IGFBPs)，鱼类在内的脊椎动物的生长主要受胰IGFs信号通路的控制。胰岛素样生长因子结合蛋白1(Insulin-like growth factorbinding pro-teins 1,IGFBP1)的主要功能是对IGF-1进行结合运载和延长半衰期，并进行组织和细胞识别定位，调节IGFs通路的生物学功能。研究表明，IGFBP1在血液循环中的代谢变化最快，以磷酸化、部分磷酸化、非磷酸化等形式在不同时期的不同组织中以不同比例存在，磷酸化的IGFBP1增加了对IGF-1的亲和力，导致其与细胞表面的结合力下降，抑制其活性。此外，魏可鹏等(2012)在建鲤IGFBP1基因上找到了两个与增重相关的SNP位点，作为建鲤增重相关的分子标记应用于育种实践。

发明内容

本发明的主要目的是找到在中华鳖生长中具有重要作用的IGFBP1基因上的单核苷酸多态性位点，并建立检测和分型的方法，将位点基因型与生长性状进行关联分析，为中华鳖生长标记辅助育种提供一种有用的分子标记。

本发明要克服的主要技术问题为，针对现有技术的不足，提供一种检测中华鳖IGFBP1 基因片段中与生长相关单核苷酸位点的试剂盒及应用。

为了达到上述目的，本发明提供的技术方案为：

所述检测中华鳖IGFBP1基因片段中与生长相关单核苷酸位点的试剂盒包含如下引物：

PCR扩增正向引物(上游外引物(FW))：5′-CCT GGA TCT CCT GAA TTG AA-3′(SEQID NO.2)；

PCR扩增反向引物(下游外引物(RW))：5′-GCC ATT TCC CAC TGA TAT TG-3′(SEQID NO.3)；

突变位点检测上游内引物(FN)：5’-CAC TCA TGG TAG GAC TAA G-3’(SEQ IDNO.4)；

突变位点检测下游内引物(RN)：5’-ATG CTG GTC TAG ATA ATA T-3’(SEQ IDNO.5)。