[发明专利]一种去除小牛血清去蛋白提取物中糖肽的方法

说明书

本发明公开了一种去除小牛血清去蛋白提取物中糖肽的方法。该方法包括下述步骤：1)降温：将小牛血清去蛋白提取液的温度降低到到‑7±0.5℃；2)向降温后的小牛血清去蛋白提取液中加入总质量0.2％‑0.25％的ZnS粉末，并搅拌均匀；3)速冻：将步骤2)得到的混合物放入‑40℃—‑45℃环境中速冻4‑4.5小时；4)退火：将步骤3)速冻后的混合物放入‑23℃的环境中静置6‑7小时；5)复融：将步骤4)退火后的混合物置于室温中，自然融化；6)过滤：将融化后的混合物过滤，除掉ZnS粉末，即可。本发明在不降低小牛血清去蛋白提取物的活性和疗效的基础上，特异性地去除小牛血清去蛋白提取物中的糖肽，降低产品诱发四型变态反应的几率。

技术领域

本发明属于化学领域，具体涉及一种去除小牛血清去蛋白提取物中糖肽方法。

背景技术

蛋白质糖基化是重要的翻译后修饰之一,有数据显示50％以上的蛋白质发生过糖基化修饰。糖蛋白在生物体内参与了许多生理病理过程,很多于疾病的发生发展有关，是很多疾病的生物标记物，例如人体疾病中的肿瘤、风湿性关节炎、阻塞性肺病等。因此很多糖基化的蛋白质(多肽)具有先天的免疫原性，能够引起机体的免疫应答，也可能引起变态反应(超敏反应)，而其中的四型变态反应就是临床常说的过敏反应。

小牛血清去蛋白提取物是小牛血清经过除蛋白得到的分子量小于5000D的小分子混合物，主要包括无机盐、寡糖、胆碱、多肽、氨基酸、单磷酸腺苷等生物活性物质。其中的多肽成分比较复杂，其中也包括少量的糖基化多肽(糖肽)，这些糖肽增加了小牛血清去蛋白提取物筋脉注射引发过敏反应的风险。此前小牛血清去蛋白提取物的提取方法中，没有特异针对糖肽的方法。临床实践中也有同类产品也有偶发过敏反应的情况，这应该和存在的糖肽有关系。

基于此，开发一种去除小牛血清去蛋白提取物中糖肽的方法，具有重要的现实意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种去除小牛血清去蛋白提取物中糖肽的方法。

本发明所提供的去除小牛血清去蛋白提取物中糖肽的方法，包括下述步骤：

1、降温：将小牛血清去蛋白提取液的温度降低到到-7±0.5℃；

2、向降温后的小牛血清去蛋白提取液中加入总质量0.2％-0.25％的ZnS粉末，并搅拌均匀；

3、速冻：将上述混合物放入-40℃至-45℃环境中速冻4—4.5小时；

4、退火：将冷冻后的混合物放入-23℃的环境中静置6-7小时；

5、复融：将退火后的混合物置于室温中，自然融化；

6、过滤：将混合物过滤，除掉ZnS粉末，即可。

本发明中所述的ZnS粉末是粉碎后通过200目筛子的粉末。

本发明在不降低小牛血清去蛋白提取物的活性和疗效的基础上，特异性地去除小牛血清去蛋白提取物中的糖肽，降低产品诱发四型变态反应的几率。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明的方法进行说明，但本发明并不局限于此，凡在本发明的精神和原则之内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

下述实施例中所使用的小牛血清去蛋白注射液是按照中国专利申请号为201510145515.5中记载的方法制备得到的。

实施例1小牛血清去蛋白注射液除糖肽的实施方法