[发明专利]猪繁殖与呼吸综合征病毒欧洲型、美洲型双重微滴数字PCR绝对定量检测试剂盒有效
| 申请号： | 201710845507.0 | 申请日： | 2017-09-19 |
| 公开（公告）号： | CN107475451B | 公开（公告）日： | 2020-02-21 |
| 发明（设计）人： | 原霖;宋晓晖;王传彬;周智;汪葆玥;杨林;吴佳俊;倪建强;韩焘;訾占超;王晓英;毕一鸣;王静;陈亚娜 | 申请（专利权）人： | 中国动物疫病预防控制中心 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅;何叶喧 |
| 地址： | 102618 北京市*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 繁殖 呼吸 综合征 病毒 欧洲 美洲 双重 数字 pcr 绝对 定量 检测 试剂盒 | ||
1.一种引物探针组合，由引物探针组LV-F1R1P1和引物探针组VR2332-F1R1P1组成；
所述引物探针组LV-F1R1P1由引物LV-F1、引物LV-R1和探针LV-P1组成；所述引物LV-F1为序列表的序列1所示的单链DNA分子；所述引物LV-R1为序列表的序列2所示的单链DNA分子；所述探针LV-P1，一个末端具有荧光报告基团，另一个末端具有荧光淬灭基团，核苷酸序列如序列表的序列3所示；
所述引物探针组VR2332-F1R1P1由引物VR2332-F1、引物VR2332-R1和探针VR2332-P1组成；所述引物VR2332-F1为序列表的序列4所示的单链DNA分子；所述引物VR2332-R1为序列表的序列5所示的单链DNA分子；所述探针VR2332-P1，一个末端具有荧光报告基团，另一个末端具有荧光淬灭基团，核苷酸序列如序列表的序列6所示；
所述探针LV-P1和所述探针VR2332-P1具有不同颜色的荧光报告基团。
2.权利要求1所述引物探针组合的应用，为如下(b1)、(b2)或(b3)：
(b1)制备用于鉴定猪繁殖与呼吸综合征病毒欧洲型和/或猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型的试剂盒；
(b2)制备用于检测待测样本是否含有猪繁殖与呼吸综合征病毒欧洲型和/或猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型的试剂盒；
(b3)制备用于检测待测样本中猪繁殖与呼吸综合征病毒欧洲型和/或猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型含量的试剂盒。
3.一种试剂盒，包括权利要求1所述引物探针组合。
4.一种用于通过数字RT-PCR检测猪繁殖与呼吸综合征病毒欧洲型和/或猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型的预混液，其中含有权利要求1中所述的引物LV-F1、引物LV-R1、探针LV-P1、引物VR2332-F1、引物VR2332-R1和探针VR2332-P1；所述预混液中，引物LV-F1的浓度为1μM，引物LV-R1的浓度为1μM，探针LV-P1的浓度为2/9μM，引物VR2332-F1的浓度为1μM，引物VR2332-R1的浓度为1μM，探针VR2332-P1的浓度为2/9μM。
5.一种用于通过数字RT-PCR检测猪繁殖与呼吸综合征病毒欧洲型和/或猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型的试剂盒，包括权利要求4所述预混液和微滴发生油。
6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括阴性对照和阳性对照；所述阴性对照为RNase Free dH2O；所述阳性对照为含有猪繁殖与呼吸综合征病毒欧洲型的总RNA和猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型的总RNA的溶液。
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