[发明专利]一种作物糖脂和磷脂的检测方法

权利要求书

1.一种作物糖脂和磷脂的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括如下步骤：

S1：向含糖脂和磷脂的作物样品中加入氯仿振荡至充分溶解后过滤；然后加入内标混合液、甲醇和乙酸铵得样品溶液；

S2：利用高效液相与质谱联用技术对S1中样品溶液进行分析；

其中，正离子检测模式：流动相A为甲醇、乙腈、水和挥发性酸的混合溶液，所述混合溶液中甲醇、乙腈和水的体积比为42.5:42.5:15；流动相B为异丙醇和挥发性酸的混合溶液；

负离子检测模式：流动相A为甲醇、乙腈、水和挥发性碱的混合溶液，所述混合溶液中甲醇、乙腈和水的体积比为42.5:42.5:15；流动相B为异丙醇和挥发性碱的混合溶液；

所述样品溶液中氯仿、甲醇和乙酸铵的体积比为300:665:35；

S2中液相梯度洗脱条件为：0～10分钟，40%流动相B；10～35分钟，40%→65%流动相B；35～42分钟，0%流动相B；

S2中色谱柱为PhenomenexKinetex C18；

所述S1中含糖脂和磷脂的作物样品的提取方法如下：

S11：将新鲜作物样品迅速加入到73～77℃下的异丙醇和抗氧剂的混合溶液中浸泡；

S12：加入提取剂对S11中的混合溶液进行提取至样品变白；然后萃取、离心得有机相；

S13：吹干S12中有机相即得S1中所述含糖脂和磷脂的作物样品；

S11中抗氧化剂为2, 6一二叔丁基对甲酚、丁基羟基茴香醚或2-叔丁基对苯二酚中的一种；

其中，S12中加入提取剂对S11中的混合溶液进行提取至样品变白；然后萃取、离心得有机相的具体步骤为：

加入1.5mL氯仿和0.6mL超纯水，混匀；然后于常温摇床上摇1小时；

将样品转移至一个新的玻璃瓶中，加入4mL的体积比为2:1、含0.01% BHT的氯仿/甲醇，摇30分钟，然后将样品溶液转移至新的玻璃瓶；重复此步骤三次至所有的样品都变白；

向含样品溶液的玻璃瓶中加入1mL 1M氯化钾，摇晃混匀，然后500rpm离心3分钟，弃去上清液；加入2mL超纯水，摇晃，然后500rpm离心3分钟，弃去上清液；

所述新鲜作物样品为水稻叶片、棉花叶片或香蕉果肉中的一种。

2.根据权利要求1所述作物糖脂和磷脂的检测方法，其特征在于，流动相A和流动相B中挥发性酸为甲酸或乙酸，所述挥发性酸的体积分数为0.1%。

3.根据权利要求1所述作物糖脂和磷脂的检测方法，其特征在于，流动相A和流动相B中挥发性碱为甲酸铵或乙酸铵，所述挥发性碱的体积分数为0.1%。

4.根据权利要求1所述作物糖脂和磷脂的检测方法，其特征在于，S2中流动相流速为300 µL/min；柱温为40℃；进样量为8 µL。

5.根据权利要求1所述作物糖脂和磷脂的检测方法，其特征在于，S2中质谱系统为ABSCIEX TripleTOF® 5600+质谱系统，所述质谱的参数设置为：雾化气：55 psi；辅助气：55psi；气帘气：35 psi；离子源温度：300℃；电压：-4.5KV/5.5KV；碰撞电压CE，正离子模式，磷脂酰乙醇胺PE和溶血磷脂酰乙醇胺LysoPE，+28V；磷脂酰胆碱PC和溶血磷脂酰胆碱LysoPC，+40V；单半乳糖二酰基甘油MGDG，+21 V；双半乳糖二酰基甘油DGDG，+24 V；负离子模式，磷脂酰肌醇PI，-58V；磷脂酰甘油PG，溶血磷脂酰甘油LysoPG和磷脂酸PA，-57V；磷脂酰丝氨酸PS，-34V。