[发明专利]一种鉴定家养绵羊是否含有盘羊血缘的方法

说明书

本发明属于基因工程技术领域，公开了一种鉴定家养绵羊是否含有盘羊血缘的方法。包括：个体DNA提取；Primer 5.0软件设计包含绵羊mtDNA D‑Loop序列的引物，以提取的DNA为模板，进行PCR扩增；扩增的PCR产物测序，DNAstar软件对测序结果进行整理、拼接、组装；从NCBI数据库中下载家养绵羊mtDNA D‑loop单倍型A和B的序列及摩弗仑羊、东方盘羊、羱羊、盘羊维式亚种、盘羊哈萨克斯坦亚种、盘羊蒙古亚种、盘羊西藏亚种和盘羊指名亚种的序列；ClustalW软件对以上序列进行多重比对，Mega 6.06的Neighbor‑Joining程序构建进化关系树，以此准确鉴定。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，尤其涉及一种鉴定家养绵羊是否含有盘羊血缘的方法。

背景技术

家养绵羊(Ovis aries)是最早被驯化的动物之一，为人类提供了大量的肉、毛、皮等生产资料。关于家养绵羊的起源，一般的观点认为家养绵羊与野生绵羊拥有共同的祖先。古生物学家、动物遗传学家通过考古、个体形态比较和解剖学等特征认为家养绵羊与野生绵羊存在共同祖先，或存在血缘关系；细胞遗传学揭示家养绵羊(2n＝54)与西伯利亚雪羊(2n＝52)、摩弗仑羊(欧洲摩弗仑羊和亚洲摩弗仑羊，2n＝54)、盘羊(2n＝56)、东方盘羊(2n＝58)等野生绵羊的染色体数目上存在差异，但在我国新疆、西藏、青海等地区，家养绵羊与野生盘羊可以繁殖后代。在我国西部地区的西藏羊的地方类群中，一些地方类群(贾洛羊)在体型、外貌、角型等特征方面与野生盘羊具有相似之处，通过体型、外貌和角型等特征来判断如贾洛羊类群含有野生盘羊的血缘或由盘羊直接驯化而来。

Sry基因是位于哺乳动物Y染色体上的一个父系遗传基因，采用其CDS序列分析阿勒泰羊、藏系贾洛羊、藏系欧拉羊与家养绵羊、盘羊及摩弗仑羊的亲缘关系，认为阿勒泰羊、藏系贾洛羊、藏系欧拉羊与普通绵羊、盘羊及摩弗伦羊存在相同的Sry基因序列，起源于共同的祖先或贾洛羊由盘羊驯化而来。

综上所述，现有技术存在的问题是：1)通过体型、外貌、角型等可视特征来判断西藏羊的地方类群的驯化或起源，不能客观地从物种本身解决这些地方类群是否起源于盘羊或含有盘羊的血缘；2)Sry基因的CDS序列高度保守，进化速度较慢，不宜于用该基因来解决西藏羊的地方类群起源于盘羊或含有盘羊血缘。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种鉴定家养绵羊是否含有盘羊血缘的方法。

本发明是这样实现的，一种鉴定家养绵羊是否含有盘羊血缘的方法，所述鉴定家养绵羊是否含有盘羊血缘的方法包括以下步骤：

步骤一，贾洛羊血样样品或组织样品的采集，个体DNA提取；

步骤二，依据NCBI数据库中登录号为NC001941的家养绵羊mtDNA全序列，采用Primer 5.0设计引物，以贾洛羊的DNA样本为模板，进行mtDNA D-loop全序列的PCR扩增；

步骤三，扩增的mtDNA D-loop的PCR产物，送测序公司进行mtDNA D-loop序列的测序，DNAstar软件进行贾洛羊mtDNA D-loop的测序结果进行整理、拼接、组装；

步骤四，从NCBI数据库中下载家养绵羊mtDNA D-loop单倍型A和单倍型B的序列及欧洲野绵羊-摩弗仑羊、东方盘羊、羱羊、盘羊维式亚种、盘羊哈萨克斯坦亚种、盘羊蒙古亚种、盘羊西藏亚种和盘羊指名亚种序列；

步骤五，采用ClustalW软件进行线粒体D-Loop的多序列比对，Mega 6.06的Neighbor-Joining程序构建摩弗仑羊、东方盘羊、羱羊及盘羊各亚种的进化关系树，判断摩弗仑羊、东方盘羊、羱羊及盘羊各亚种等是否与贾洛羊的单倍型A、单倍型B和单倍型C归为一类，确定贾洛羊与摩弗仑羊、东方盘羊、羱羊及盘羊各亚种间存在共同的祖先或共有血缘关系。