[发明专利]一种骨肽提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及多肽提取领域，特别是一种骨肽提取方法。

背景技术

骨肽是一种可以促进关节修复，对骨质增生、颈椎病及风湿、类风湿关节炎、骨质疏松症,骨折及骨科术后愈合及其它骨病有一定的辅助治疗的作用。

现有技术中，通常采用酶解的方式对骨肽进行提取，如CN200810190944.4公开了一种复合蛋白骨肽乳,取新鲜畜禽骨1000-2000KG、油脂150-250KG和饮用水1800-2200KG蒸煮后所得蒸煮汤液的滤液,加0.05-0.09KG的食盐,浓缩至含水量以重量百分比计为37-33％的骨肽基液600-650KG和取由500-600KG食用菌、1400-1500KG鲜乳和500-550KG的饮用水混合后,用25-30G水解蛋白液进行酶解后得的滤液浓缩至含水量以重量百分比计为28-32％后加入90-110KG皮粉制成的骨肽乳基液180-185KG,再将600-650KG骨肽基液和180-185KG骨肽乳基液混合后加入乳化剂0.06-0.07KG用纯净水调整至含可溶性固形物以重量百分比计为7-13％。

CN200810148842.6公开了一种骨肽提取物的制备方法,包括以下步骤:(1)将猪四肢骨破碎后加水热压提取；提取液浓缩,得浓缩液,备用；(2)酸沉:向浓缩液中加入稀盐酸进行酸沉；(3)碱沉:将酸沉液过滤,向滤液中加入碱液进行碱沉；(4)醇沉:将碱沉液过滤,向滤液中加入稀盐酸,减压浓缩后,冷却,加入乙醇,0-5℃静置12H以上,得药液,备用；(5)超滤:将步骤(4)所得药液超滤,收集超滤液,将超滤液混合均匀,即得。

CN200610033055.8公开了一种用于预防、治疗骨质疏松症的活性骨肽及其制备方法，该方法是①取新鲜的动物四肢骨，清洗，消毒，粉碎，加入蒸馏水，在恒温反应罐内以蛋白酶控制水解，离心分取上清液；②上清液脱脂，浓缩，乙醇提取，滤出上清液；③上清液脱醇，离心超滤，收集滤过液得生物活性骨肽；④活性骨肽原料制成任何一种药剂学上所述的剂型。

上述的技术中都是将骨头和骨髓一起进行处理，以期获得尽可能多的多肽，现有技术中大多将骨头和骨髓一起进行酶解，导致骨髓中的蛋白质过度分解成为氨基酸，降低了骨肽的提取效率。

发明内容

本发明旨在提供一种多肽提取率高的骨肽提取方法。

其具体方案为：一种骨肽提取方法，包括如下步骤：

步骤1：将动物骨头去除骨膜后碾碎，取出骨髓；

步骤2：将骨髓分散到6-8倍骨髓重量的水中在36℃-38℃的恒温水浴中通过超声处理使骨髓细胞破裂，超声频率为250-300KHz；

步骤3：将步骤2处理得到的混合物进行微波加热处理，微波加热处理时间为4-5min，微波频率为2300-2400MHz；混合物加热后的温度为75-80℃；

步骤4：将步骤3处理得到的混合物冷却至室温后加入霉菌蛋白酶、杆菌蛋白酶复合酶水解3-6h，水解温度为45-47℃，水解结束后对蛋白酶高温灭活；霉菌蛋白酶的用量为2000U/g骨髓，杆菌蛋白酶的用量为4000U/g骨髓；

步骤5：将步骤4得到的混合物通过降温、离心后得到上清液；

步骤6：将上清液经过后处理得到骨肽。

在上述的骨肽提取方法中，步骤1中还包括对取出的骨髓通过有机溶剂萃取分离油脂。

在上述的骨肽提取方法中，所述的萃取溶剂为正己烷、异丙醇、石油醚、DMSO中之一或任意两种组合。

在上述的骨肽提取方法中，步骤4中，水解前调节混合物的pH值为7.5-8。

在上述的骨肽提取方法中，调节pH值所用的酸为有机酸，所述的有机酸为草酸、柠檬酸、乳酸、乙酸中的一种或多种。

在上述的骨肽提取方法中，步骤2中超声处理时间为30-60s。

在上述的骨肽提取方法中，步骤3中，微波处理时，反应器中的真空度为-43Kpa～-49Kpa。

在上述的骨肽提取方法中，所述的步骤6具体为：通过透析处理得到分子量小于8000的外透液，将外透液真空浓缩；将浓缩液冷冻至4℃后，加入5倍浓缩液体积的-20℃的丙酮，静置一段时间后过滤，并通过真空喷雾干燥得到骨肽。

在上述的骨肽提取方法中，所述的喷雾干燥时，进风温度控制在110-160℃，出风温度控制在60-85℃。

本发明的有益效果在于：

本发明采用超声破碎细胞，微波加热使蛋白质产生轻微变性，然后通过复合酶进行酶解，三者结合相比于传统的酶解方式，其酶解率提高了30％以上。