[发明专利]肺癌细胞特异性结合多肽及其制备方法

说明书

本申请提供了以高的亲和力和特异性结合肺癌细胞的多肽，可用于指示肺癌细胞以及肺癌诊断。还提供了编码多肽的核酸分子、制备多肽的方法以及包含该多肽的癌症诊断偶联物以及试剂盒。

技术领域

本发明属于蛋白质多肽技术领域，具体涉及一种可与肺癌细胞特异性结合的多肽及其制备方法。

背景技术

肺癌发生于支气管黏膜上皮，其发病率和死亡率增长很快。近50年来肺癌的发病率显著增高，在欧美工业发达国家和我国的一些工业大城市中，肺癌发病率在男性恶性肿瘤中已居首位；女性发病率也迅速增高，位居女性常见恶性肿瘤的第2位。因此，肺癌是对人类健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。由于肺癌发病的隐匿性，发病早期多无症状，导致几乎2/3的肺癌患者在就诊时已是晚期(Ⅲ期或Ⅳ期)。目前，我国肺癌早期诊断率较低，导致患者5年生存率仅有10％，而国外发达国家是15％-20％。因此，急需提高肺癌早期诊断率。

传统的肺癌临床诊断方法如胸片、支气管镜、痰细胞学检查等方法缺乏足够的特异性和敏感性，因此急需开发出一种新的用于临床诊断肺癌、特别是早期肺癌的方法。

随着肿瘤分子生物学研究的进展，越来越多的肺癌标记物及筛查手段被应用于临床。肿瘤标志物是指在肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞所产生或分泌并释放到血液、细胞、体液中而反映肿瘤存在和生长的一类物质。标志物检测肺癌具有高效率、高灵敏性、方便、标本易获取及创伤小等优点，因此筛选、鉴定及检测肿瘤标志物一直是肺癌早期诊断研究的重点。

当前被认为有意义的肺癌肿瘤标志物有如下几类：

癌胚抗原(CEA)；

糖蛋白类抗原：糖抗原(carbohydrate antigen)19-9、糖抗原15-3、鳞状细胞癌抗原等；

角蛋白类抗原：细胞角蛋白片段抗原(cytokeratin fragment antigen)21-1、组织多肽特异性抗原(tissue polypeptide specific antigen)等。

酶类抗原：前胃液素肽(Pro-gastrinpeptide)、乳酸脱氢酶(lacticdehydrogenase)、谷胱甘肽转移酶(glutathione transferase)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases)等。

虽然这些标志物有一定的代表性，但其缺点是特异性不高，如就CEA而言，除在胚胎性肿瘤组织外，在成人胃肠、肺、乳腺等腺癌组织中均表达癌胚抗原CEA。所以，本领域需要寻找肺癌细胞特异性的靶点。

癌症诊断领域迫切需要开发灵敏度高，特异性强的体外诊断产品。采用特异性小分子肽识别实体肿瘤癌细胞作为一种新型的肿瘤鉴定手段，具有良好的商业发展前景。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足之处，筛选一种既具备传统抗体分子的优点，而且分子量小，容易到达肿瘤组织部位，并以高的亲和力和特异性与肺癌细胞结合的多肽。

本申请将编码多肽的外源DNA片段与噬菌体表面蛋白的编码基因融合，使融合蛋白展示在噬菌体的表面。导入的多种多样的外源基因形成了一个库。以蛋白或细胞为靶点，对噬菌体库进行反复筛选，并随之对其进行扩增，特定的噬菌体克隆由于对其配体的特异亲和性而不断地得到富集，从而能够快速、有效地将相对稀少的可以高效结合配体的克隆从文库中筛选出来。

本申请的第一方面提供了一种指示肺癌细胞的多肽，所述多肽具有SEQ.ID.No.1所示的氨基酸序列或与SEQ.ID.No.1具有80％-99％同源性的氨基酸序列。优选地，所述肺癌细胞是A549细胞。