[发明专利]基于智能恒温扩增技术检测沙门氏菌的引物组、试剂盒及方法

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，涉及一种基于智能恒温扩增技术检测沙门氏菌的引物组、试剂盒及方法。

背景技术

沙门氏菌是一种常见、重要的人兽共患病原菌，在公共卫生学上具有重要意义。沙门氏菌是主要的肠道致病菌，易引起食物中毒。在我国，以沙门氏菌引起的食物中毒占细菌性食物中毒的首位。目前对食品中的沙门氏菌检测手段仍采用常规生物学培养鉴定法辅以抗原和抗体的免疫学检测技术，病原微生物分离培养、生理生化鉴定、血清分型和免疫酶等表型特征检测方法，常规方法繁琐、耗时耗力，不能满足日益发展的需要。因此，为有效地预防和控制疾病发生，建立快速、敏感而又特异的检测沙门氏菌的方法是非常必要的。但这些检测技术对检测人员技术水平要求高，并且这些技术需要的检测仪器昂贵、检测周期长，难以实现快速检测推广的目的。所以，在食品检测和科学研究实践中均需要一种降低操作技术和费用、快速简便、容易普及、安全可靠的检测方法。

发明内容

有鉴于此，本发明所解决的技术问题在于提供一种基于智能恒温扩增技术检测沙门氏菌的引物组。

本发明所解决的技术问题还在于提供一种基于智能恒温扩增技术检测沙门氏菌的试剂盒。

本发明所解决的技术问题还在于提供一种基于智能恒温扩增技术检测沙门氏菌的方法。

为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案如下：

一方面，本发明公开了一种基于智能恒温扩增技术检测沙门氏菌的引物组，包括TP引物、FP引物、BP引物、OP1引物和OP2引物，其核苷酸序列分别如下所示:

FP引物：TTTATATATATATAAAGTTATTGGCGATAGCC

TP引物：AGCCTGGCGGTTGGACCACGGTGACAATAG

BP引物：GGTTTTGTTGTCTT

OP1引物：CGCCACGTTCGGGCAATT

OP2引物：TTTGGTAATAACGATAAA。

优选地，扩增反应时，TP引物、FP引物、BP引物、OP1引物和OP2引物的摩尔比为：8：8：4：1：1。

另一方面，本发明还公开了一种基于智能恒温扩增技术检测沙门氏菌的试剂盒，该检测试剂盒中含有上述方案中所列的智能恒温扩增引物组。

优选地，该智能恒温扩增检测试剂盒还包括以下成分的部分或者全部：(1)DNA聚合酶；(2)错配结合蛋白；(3)智能恒温扩增反应液；(4)荧光显色剂；(5)阳性对照和阴性对照。

优选地，该智能恒温扩增检测试剂盒中，其引物中TP引物、FP引物、BP引物、OP1引物和OP2引物的摩尔比为：8：8：4：1：1。

优选地，所述DNA聚合酶为Bst DNA聚合酶；所述错配结合蛋白为Tap Muts错配结合蛋白。

优选地，所述智能恒温扩增反应液含有：28mM dNTPs、10％DMSO、40mM Tris-HCl(pH8.8)、20mM KCl、20mM(NH4)2SO4、16mM MgSO4，0.2％20。

优选地，阳性对照为含有沙门氏菌invA基因片段的T载体克隆，阴性对照为不含沙门氏菌invA基因片段的水或其他溶剂。更优地，阴性对照为去离子水。

优选地，所述显色剂为1/50000原液稀释的Green I。

再有，本发明还公开了一种基于智能恒温扩增技术检测沙门氏菌的方法，包括如下步骤：

(1)待检样品DNA的提取；

(2)智能恒温扩增反应：将步骤(1)中提取的待检样品DNA加入智能恒温扩增反应体系中，混匀后离心，并于63℃反应20-40min；该智能恒温扩增反应体系中含有上述方案中所述的智能恒温扩增引物组；

(3)结果判断：通过观察ESE-tubescanner扩增仪的扩增曲线判断扩增结果。

优选地，所用智能恒温扩增反应的体系为：25μL反应体系中含有TP和EP引物各1.6μmol/L、BP引物0.8μmol/L、OP1和OP2引物各0.5μmol/L、dNTP 0.5mmol/L、甜菜碱0.6mol/L、(NH4)2SO4mmol/L、MgCl2 2.5mmol/L、KCl 10mmol/L、MgSO4 2mmol/L、Green I 0.5μL、pH为8.8的Tris-HCl 20mmol/L、0.2％20、6U Bst DNA聚合酶、1μg Tap Muts、1μL步骤(1)中提取的待检样品DNA，用去离子水补齐到25μL。