[发明专利]一种检测鼻气管鸟杆菌的试剂盒及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及生物技术和动物疫病诊断领域，具体公开了一种检测鼻气管鸟杆菌的试剂盒及其制备方法与应用。本发明提取B型鼻气管炎鸟杆菌的脂多糖作为包被抗原，该纯化的抗原对ORT具有很强的特异性、敏感性，可一次性实现对18个血清型ORT的检测，能真实准确地反应鸡群中ORT的抗体水平。本发明使用辣根过氧化物酶标记的兔抗禽IgG作为酶标抗体，可广泛针对禽类，如鸡、鸭和鹅等进行通用性的检测，提高了本试剂盒的通用性。

技术领域

本发明涉及生物技术和动物疫病诊断领域，具体地说，涉及一种检测鼻气管鸟杆菌的试剂盒。

背景技术

鼻气管炎鸟杆菌病是由鼻气管鸟杆菌(Ornithobacterium rhinotracheale，ORT)引起的肉鸡和火鸡的一种急性、高度接触性呼吸道传染病。该病以呼吸道困难、生长障碍及严重的纤维素性化脓性肺炎和气囊炎为特征。而且易继发或并发大肠杆菌、副鸡嗜血杆菌、败血支原体及传染性支气管炎、新城疫、鸡传染性贫血病等细菌和病毒的感染，导致鸡群出现大量死亡。目前，该病在世界许多国家和地区的流行正呈上升趋势，严重危害养禽业的发展。

ORT与里默氏菌属相似，为rRNA超家族V科的一个新属，该菌从A～R有18个血清型，常见的为A、B、C和D型，不同血清型的菌株毒力有差异，高致病性菌株如A型和B型，主要引起鸡发生临床疾病，且广泛流行。

快速诊断该病是预防和控制ORT病的有效措施之一，对ORT的诊断目前已建立了常规的分离培养、PCR和地高辛标记探针诊断方法。但由于ORT有18个血清型，上述方法需要在事先明确检测目的的情况下，针对某个血清型进行检测，而检测结果仅能判断待检样品是否为该血清型，当待检样品为其他血清型时，无法在一次检测中被鉴定或判断出来。

中国专利申请CN201310340100.4公开了通过筛选ORT高血凝活性菌株，培养、洗涤制备ORT血凝抗原；通过采集绵羊血液，洗涤和离心方法制备绵羊红细胞，用戊二醛固定并用鞣酸鞣化制备醛化绵羊红细胞；通过ORT菌悬多次免疫鸡，采血离心制备ORT标准阳性血清；将制备的ORT血凝抗原、醛化绵羊红细胞和ORT标准阳性血清组装建立鸡鼻气管鸟杆菌血凝抑制抗体检测试剂盒。但其在制备抗体过程中使用保藏编号为CCTCC No：M2013318的鸡鼻气管鸟杆菌制作ORT血凝抗原，血凝试验敏感性低，加之ORT血清型有18个之多，通过单一菌株实现对不同血清型的抗体进行检测，难度非常大。

因此，亟需提供一种高通量、高特异性、高灵敏度的检测鸡体内的ORT抗体水平的检测试剂盒。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种检测鼻气管鸟杆菌的试剂盒及其制备方法与应用。

为了实现本发明目的，本发明的技术方案如下：

本发明提供一种检测鼻气管鸟杆菌的试剂盒，可高通量、高特异性检测鸡体内的ORT抗体水平的检测试剂盒。

所述试剂盒包括：包被有鼻气管鸟杆菌脂多糖的固相载体、酶标抗体、鼻气管鸟杆菌阴性对照血清和阳性对照血清；所述鼻气管鸟杆菌脂多糖来自B型鼻气管炎鸟杆菌。

脂多糖(Lipopolysacchride，LPS)是脂质双层向细胞外伸出，包括类脂A、核心多糖、特异性多糖。类脂A为一种糖磷脂，为革兰氏阴性菌的致病物质，无种属特异性，可做为广谱抗原建立检测方法；核心多糖位于类脂的外层，具有属的特异性，同一属细菌的核心多糖相同；特异性多糖在脂多糖的最外层，是革兰氏阴性菌的菌体抗原(O抗原)，是决定细菌抗原特异性的成分。因此，以LPS为包被抗原建立通用型检测方法，可以最大程度地保证检测方法的特异性、敏感性和通用性，并且LPS抗原制备简单，能够很好地保证所制备抗原的均一性。若以其它膜蛋白为靶抗原建立检测方法，抗原制备工艺复杂，检测方法的通用性、敏感性将会有很大程度的降低，仅适合用于单一血清型抗体检测方法的建立。

其中，所述鼻气管鸟杆菌脂多糖的制备方法为：