[发明专利]一种检测鸭瘟病毒UL48基因的引物以及RT-PCR和荧光定量PCR检测方法

说明书

本发明公开了一种检测鸭瘟病毒UL48基因的引物以及RT‑PCR和荧光定量PCR检测方法，引物序列见SEQ ID No:1和2，采用该引物对样品RNA、DNA或cDNA进行RT‑PCR和荧光定量PCR检测，荧光定量PCR反应体系为2×SYBR Premix EX Taq^TMII 5μL，模板0.5μL，PCR Primer各0.5μL，添加ddH₂O至体系为10μL；反应程序95℃预变性30s，95℃变性10s，53.9℃退火和延伸30s，共40个循环。采用该引物和检测方法可简便、快捷的检测鸭瘟病毒及相应基因和基因转录情况，对潜伏感染病毒的鸭子进行及时处理，该引物特异性好，灵敏度高，检测结果可靠。

技术领域

本发明属于鸭瘟病毒检测技术领域，具体涉及一种检测鸭瘟病毒UL48基因的引物以及RT-PCR和荧光定量PCR检测方法。

背景技术

鸭瘟病毒(Duck Plague Virus，DPV)又称鸭疱疹病毒1型，属于α疱疹病毒，DPV感染所致的鸭瘟(Duck plague，DP)引起鸭/鹅急性、热性、败血性疾病，是一种高度致死性传染病。

鸭瘟的传染源主要是病鸭和病鹅，以及带毒的家禽和野生水禽。感染潜伏期通常为2至4天。传播途径主要是消化道，也可经交配、眼结膜或呼吸道传播。口服、滴鼻、点眼、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、泄殖腔接种等人工感染途径均可使易感鸭致病。该病一年四季均可流行，但以春夏之交和秋季流行最为严重。

鸭一旦感染鸭瘟病毒，其初期临床症状体温升高常达43℃或以上，呈高稽留热、精神沉郁、食欲减退或废绝，突出病状是流泪和肿头，病鸭的头和颈部皮肤肿胀，出现典型“大头瘟”的症状；同时病鸭伴随下痢，眼角膜浑浊，严重者可能产生溃疡的症状，病理变化主要表现为急性败血症，直肠和十二指肠最为严重，产蛋母鸭的卵巢滤泡增大，卵泡的形态不整齐。

根据鸭瘟的临床症状特点可对疾病进行初步的诊断，可禽类疾病种类繁多，临床表现存在相似的情况，容易造成误判并耽误疾病的最佳治疗和防控的时间；而且，未发病的鸭子体内常出现潜伏感染并会引起病鸭免疫抑制，鸭子更易感染疾病。故潜伏感染鸭子的检测与筛选也显得尤为重要。实验室检测方法是目前主要的检测DPV的手段，但现有方法中如中和试验、ELISA等免疫学手段检测病毒所需时间长，而传统PCR方法适合中到高拷贝数病毒的检测，在鸭瘟防控工作中容易出现疏漏，使得体内DPV含量较低的鸭子不能得到及时处理，时刻威胁着鸭场中其它未感染的健康鸭。

发明内容

针对现有技术中的上述不足，本发明提供一种检测鸭瘟病毒UL48基因的引物以及RT-PCR和荧光定量检测方法，可简便、快捷的检测鸭瘟病毒及相应基因转录情况，对潜伏感染病毒的鸭子进行及时处理，且引物及检测方法灵敏度高，特异性好，检测结果可靠。

为解决上述的技术问题，本发明采用的技术方案为：

一种用于检测鸭瘟病毒UL48基因的引物，引物序列为：

UL48-F：5’-GCGGGAAATATCATCACGACT-3’；

UL48-R：5’-CATTCAATAAGACGACGCCAT-3’。

一种鸭瘟病毒UL48基因的RT-PCR检测方法，包括以下步骤：

(1)提取样品RNA，经过反转录反应合成cDNA；

(2)以cDNA为模板，采用上述引物UL48-F和UL48-R进行RT-PCR反应，反应体系为：2×PCR Mix10μL，模板1μL，8μmol/L的UL48-F和UL48-R各1μL，添加ddH₂O至反应体系为20μL；

反应程序为95℃预变性30s，95℃变性10s，54℃退火25s，72℃延伸30s，共40个循环。