[发明专利]一种检测P16抑癌基因缺失的方法、探针及试剂盒

说明书

本发明涉及一种检测P16抑癌基因缺失的方法、探针及试剂盒，该方法采用一组双色探针对癌症组织进行原位杂交，根据检测到的荧光信号判断是否存在所述P16抑癌基因的缺失。所述的一组双色探针是(1)标记为红色的P16基因探针(2)标记为绿色的9号染色体中心粒探针。本发明方法设计周全，操作简单，特异性和敏感性高，可以快速，准确，直观地测出P16抑癌基因的缺失，检测结果准确可靠，从而可作为医师对恶性肿瘤进行分子病理分型的参考依据，适用于大规模推广应用。

技术领域

本发明涉及恶性肿瘤相关基因检测技术领域，具体是指一种P16抑癌基因缺失的检测方法和相关检测探针及试剂盒。

背景技术

p16基因又叫MTS(multiple tumor suppressor 1)基因，是1994年美国冷泉港实验室Kamb等发现的新抗癌基因，这是一种细胞周期中的基本基因，直接参与细胞周期的调控，负调节细胞增殖及分裂，在人类50％肿瘤细胞株纯发现有纯合子缺失，突变，认为p16是比p53更重要的一种新型抗癌基因.有人把它比作细胞周期中的刹车装置，一旦失灵则会导致细胞恶性增殖，导致恶性肿瘤发生。P16基因已经在肺癌、乳腺癌、脑肿瘤、骨肿瘤、皮肤癌、膀胱癌、肾癌、卵巢癌和淋巴瘤、黑色素瘤中发现纯合子缺失以及无义，错义及移码突变，表明p16基因以缺失，突变方式广泛参予肿瘤形成，检测p16基因有无改变对判断患者肿瘤的易感性以及预测肿瘤的预后，具有十分重要的临床意义。

抑癌基因(tumor suppressor gene)是细胞内与细胞增殖相关的基因，是维持机体正常生命活动所必须的，在进化上高度保守。当抑癌基因的结构或调控区发生缺失，使细胞过度增殖，从而形成肿瘤。P16是一种和肺癌发病密切相关的位于人类9号染色体(2p16.1)的抑癌基因。P16基因的缺失，对于肺癌等恶性肿瘤的靶向治疗具有重要指导意义。

目前，市场上检测P16基因缺失主要用PCR方法，由于检测的是肿瘤和正常细胞的混合物，因此结果不够准确，而市场上亦迫切需要一种更为准确的检测方法。

发明内容

本发明的主要目的就是提供一种P16抑癌基因缺失的FISH检测方法，探针及试剂盒。

本发明采用的技术方案为：

本发明提供了一种P16抑癌基因缺失的FISH检测方法，该方法采用一组双色探针对癌症组织进行原位杂交，根据检测到的荧光信号判断是否存在所述P16抑癌基因的缺失。所述的一组双色探针是(1)标记为红色的P16基因探针(2)标记为绿色的9号染色体中心粒探针。

本发明还提供了一种P16FISH检测探针，该探针为一组双色探针，所述的一组双色探

针是(1)标记为红色的P16基因探针(2)标记为绿色的9号染色体中心粒探针。

本发明还提供了一种P16抑癌基因缺失的FISH检测试剂盒，该试剂盒包括一组双色探针，还包含细胞核染色试剂DAPI，荧光淬灭剂，以及FISH探针稀释液；所述的一组双色探针是(1)标记为红色的P16基因探针(2)标记为绿色的9号染色体中心粒探针。

本发明所具有的有益效果：

本发明方法设计周全，操作简单，特异性和敏感性高，可以快速，准确，直观地测出P16抑癌基因的缺失，检测结果准确可靠，从而可作为医师对恶性肿瘤进行分子病理分型的参考依据，适用于大规模推广应用。

具体实施方式

为更好的理解本发明的内容，下面结合具体实施例作进一步说明。下列具体实施例采用的主要试剂，仪器和操作步骤如下：

一、探针DNA的获取

1)划线接种：将携带有P16基因和9号染色体中心粒的BAC菌种划线接种于含有抗生素(氯霉素)的琼脂平板上，37℃培养过夜(约14小时)。