[发明专利]一种生物传感器及其制备方法、靶分子浓度检测方法

权利要求书

1.一种生物传感器的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：S1，将链霉亲和素、羧基、氨基、巯基中的一种或者多种修饰到磁珠上，将生物素修饰到待检测的靶分子的核酸适配体上；S2，在反应液中加入所述核酸适配体和所述磁珠，将所述核酸适配体偶联到所述磁珠的部分位点上；所述反应液为浓度在100mM以上的盐缓冲液；S3，将能与所述核酸适配体互补配对的DNA序列偶联到贵金属纳米粒子上；S4，将步骤S2得到的磁珠和步骤S3得到的贵金属纳米粒子置于杂交液中反应5～60min，通过碱基互补配对，形成由磁珠、核酸适配体、贵金属纳米粒子构成的生物传感器。

2.根据权利要求1所述的生物传感器的制备方法，其特征在于：步骤S2中将所述核酸适配体序列偶联到所述磁珠上后还包括：在所述反应液中加入游离的生物素，将所述生物素偶联到所述磁珠的另外部分位点上；磁分离洗涤后，再将封闭剂连接到所述磁珠上进行封闭。

3.根据权利要求2所述的生物传感器的制备方法，其特征在于：所述封闭剂为牛血清蛋白、脱脂奶粉或者无交叉反应的血清。

4.根据权利要求1所述的生物传感器的制备方法，其特征在于：步骤S2中，所述盐缓冲液为Tris的盐缓冲液。

5.根据权利要求1所述的生物传感器的制备方法，其特征在于：步骤S3中，所述贵金属纳米粒子为金纳米球颗粒、金纳米棒颗粒、金/银复合纳米颗粒、金纳米星颗粒、金纳米立方体颗粒、金纳米双锥颗粒。

6.根据权利要求1所述的生物传感器的制备方法，其特征在于：步骤S4中，所述杂交液包括PBS缓冲液、NaCl溶液和SDS。

7.根据权利要求6所述的生物传感器的制备方法，其特征在于：所述杂交液包括10mM、pH值为7.4的PBS缓冲溶液，0.3m的NaCl,0.01％SDS。

8.一种根据权利要求1～7任一项所述的制备方法制得的生物传感器。

9.一种靶分子浓度检测方法，其特征在于：包括以下步骤：A1，根据权利要求1～7任一项所述的制备方法制得生物传感器；A2，在检测用反应液中加入所述生物传感器和待测定浓度的靶分子溶液，充分反应，使得所述生物传感器中的所述贵金属纳米粒子游离到反应液中；A3，通过包含氨基、羧基、巯基、羟基中的一种或者多种的硅烷溶液对载玻片进行表面修饰，使所述载玻片的表面形成一层自组装膜；A4，通过磁分离技术，吸取步骤A2中反应液中的上清液，置于步骤A3的载玻片上制成样本，利用暗场显微镜对样本中的贵金属纳米粒子进行计数；A5，根据步骤A4的计数以及暗场显微镜分析下所述贵金属纳米粒子的个数与靶分子溶液浓度之间的定标曲线，计算得到当前靶分子溶液的浓度。

10.根据权利要求9所述的靶分子浓度检测方法，其特征在于：步骤A3中，所述硅烷溶液为3-氨丙基三乙氧基硅烷溶液。