[发明专利]一种用于临床级慢病毒的稳定剂及其使用方法

说明书

本发明涉及生化医药领域，尤其涉及一种用于临床慢病毒的稳定剂及其使用方法，该用于临床慢病毒的稳定剂包括10‑20g/ml蔗糖、40‑100mg/L生育酚和10‑20g/ml人血白蛋白，余量为pH7.4的0.01mol/L PBS缓冲液，并采用0.22μm的滤器过滤获得。该用于临床慢病毒的稳定剂的使用方法是将临床级慢病毒悬浊液与所述用于临床慢病毒的稳定剂以9:1的体积比例轻轻混匀，并进行分装，将分装后的临床级慢病毒悬浊液在‑80℃环境下储存。经验证，使用了本发明的慢病毒在‑80℃储存6个月后滴度没有任何下降，冻融一次后滴度没有明显下降，冻融三次后滴度损失仅10%，符合慢病毒的生产、运输和使用过程中的储存要求。本发明成分简单，使用步骤少，不需使用额外的仪器设备，容易进行质量控制，符合临床应用要求。

技术领域

本发明涉及生化医药领域，尤其涉及一种用于临床级慢病毒的稳定剂及其使用方法，本发明可应用于细胞治疗及其他需要对慢病毒进行长期储存的领域。

背景技术

慢病毒是由人类免疫缺陷病毒(HIV)，通过去除env、vif、vpr、vpu、nef等毒性基因改造而来。复制缺陷型HIV载体通常用水泡口炎病毒(vesicular stomatitis virus)G糖蛋白(VSV-G)来代替HIV-1的包膜进行包装，从而更安全，宿主范围更广，还能增加病毒的滴度。慢病毒载体不仅能感染分裂细胞，也能感染静止期细胞，并且能稳定整合至宿主细胞，实现长期表达。在造血干细胞移植治疗应用方面，慢病毒由于能感染大部分处于静止期的造血干细胞，已经成为一种有效的感染HSCs和进行基因治疗的工具。另外，慢病毒载体是Car-T治疗方法中常用到的载体。因此，慢病毒载体的临床应用范围将越来越广泛。

慢病毒载体的低稳定性严重影响生产，使得慢病毒载体的临床制备变成一个很难达到的目标。用细胞培养基来储存慢病毒载体是提高稳定性的一个有效方法，但细胞培养基成分多，对于临床应用的质量控制不利，且在使用过程中，不得不成倍增加慢病毒载体的体积，从而降低了成品的滴度，影响后续的临床应用。

纯化后的高纯度临床级慢病毒载体由于经过多步骤的纯化，在-80℃非常容易失活，一周内的损失高达20％-70％。另外，解冻过程对滴度的影响大且不稳定。目前没有能增加慢病毒载体的稳定性且符合临床应用要求的稳定剂的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于临床慢病毒的稳定剂及其使用方法,应用于慢病毒的储存领域,既能够增加慢病毒的稳定性,又能符合临床应用要求。

本发明是这样实现的：一种用于临床慢病毒的稳定剂，包括10-20g/ml蔗糖、40-100mg/L生育酚和10-20g/ml人血白蛋白，余量为PBS缓冲液。

其中，蔗糖：非渗透性保护剂，减少冷冻及解冻过程中渗透压改变对慢病毒包膜VSVG的影响，具有膜稳定的作用，从而保证病毒感染细胞的能力即滴度。

生育酚(D-α-tocopherol acetate)：抗氧化能力强，可减少氧化应激反应对慢病毒包膜VSVG的影响。

人血白蛋白(rHSA)：减少在冷冻环境下及温度变化过程中对慢病毒的影响。

PBS缓冲液：慢病毒载体的冻存过程提供合适的离子平衡和pH等环境，减少环境对慢病毒的影响。

上述蔗糖、生育酚、人血白蛋白和PBS缓冲液的原料均要求符合GMP要求。

采用上述技术方案，因为稳定剂的成分简单，临床应用时容易进行质量控制；稳定效果好：蔗糖、生育酚、人血白蛋白、PBS缓冲液保证了慢病毒的稳定性，减少环境对慢病毒的影响，确保慢病毒的感染细胞的能力。

作为本发明的进一步改进，所述PBS缓冲溶液为pH7.4的0.01mol/L PBS缓冲液。