[发明专利]一种血液中氨基末端脑利钠肽前体的检测方法及检测试剂盒

权利要求书

1.一种血液中氨基末端脑利钠肽前体的检测方法，其特征在于，包括步骤：

1)用链霉亲和素包被磁珠；

2)用生物素标记氨基末端脑利钠肽前体单克隆第一抗体；

3)将步骤1)包被有链霉亲和素的磁珠与步骤2)标记有生物素的氨基末端脑利钠肽前体单克隆第一抗体结合反应，得磁珠-SA-生物素-NT-proBNP单抗溶剂；

4)用氨基末端脑利钠肽前体单克隆第二抗体标记吖啶酯，制得吖啶酯-NT-proBNP单抗溶剂；

5)将步骤3)制得的磁珠-SA-生物素-NT-proBNP单抗溶剂与待测NT-proBNP结合之后，再与步骤3)制得的吖啶酯-NT-proBNP单抗溶剂发生结合反应，形成双抗体夹心复合物；

6)将该双抗体夹心复合物经清洗后，使形成带有可检测的信号生成物质，检测样本中氨基末端脑利钠肽前体的含量。

2.根据权利要求1所述的血液中氨基末端脑利钠肽前体的检测方法，其特征在于，步骤1)中所述磁珠与所述链霉亲和素的质量比为1:5-1:50。

3.根据权利要求1所述的血液中氨基末端脑利钠肽前体的检测方法，其特征在于，步骤2)中所述氨基末端脑利钠肽前体单克隆第一抗体与所述生物素的质量比为1:10-1:100。

4.根据权利要求1所述的血液中氨基末端脑利钠肽前体的检测方法，其特征在于，步骤3)中所述磁珠包被链霉亲和素与所述生物素标记抗体的质量比为150:1-250:1。

5.根据权利要求1所述的血液中氨基末端脑利钠肽前体的检测方法，其特征在于，步骤4)中所述氨基末端脑利钠肽前体单克隆第二抗体与所述吖啶酯的质量比为1:5-1:20。

6.一种用于如权利要求1-5任一项所述检测方法的检测试剂盒，其特征在于，包括由若干并排设置的孔位组成的试剂条，所述试剂条包含的试剂有磁珠-SA-生物素-NT-proBNP单抗溶剂、吖啶酯-NT-proBNP单抗溶剂。

7.根据权利要求6所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂条上的一孔位内设有磁棒套。

8.根据权利要求6所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含校准品、磁珠清洗液以及预激发液。

9.根据权利要求8所述的检测试剂盒，其特征在于，所述磁珠清洗液是含有吐温、防腐剂的Tris-HCl缓冲液。

10.根据权利要求8所述的检测试剂盒，其特征在于，所述预激发液是含有双氧水、硝酸溶液；所述校准品是含有一定量的NT-proBNP抗原的酪蛋白酸钠溶液。

11.根据权利要求6所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂条上的0号位设有磁棒套；1号位设有磁珠-SA-生物素-NT-proBNP单抗溶剂；3、5、6、7号位设有磁珠清洗液；4号孔位设有吖啶酯-NT-proBNP单抗溶剂；8号位设有预激发液。

12.一种如权利要求6-11任一项所述检测试剂盒的使用方法，其特征在于，检测时，所述试剂条(4)置放于孵育仓(3)内，所述孵育仓(3)设置于输送带(2)上，所述输送带(2)连接水平位移电机(1)，所述输送带(2)的末端设有分析读数模块(13)；并采用可相对磁棒套(5)上下移动的上吸式磁珠转移枪实现所述试剂条上取磁棒套、吸取磁珠、磁珠洗脱、磁珠混匀、磁棒套打脱动作；

所述上吸式磁珠转移枪，包括可与所述磁棒套(5)过盈连接的提取枪枪头(12)、位于所述提取枪枪头(12)轴心线上用于吸附磁珠(16)的磁棒(15)，所述磁棒(15)由提取电机(10)驱动并相对所述提取枪枪头(12)上下移动；

具体包括如下使用步骤：

通过上吸式磁珠转移枪提取0号位孔的磁棒套(5)，整个检测在一个连体的试剂条(4)中进行，样本加在2号位孔后，磁棒套将第1号位孔的磁珠-SA-生物素-NT-proBNP单抗提到2号位孔，完成第一步反应；反应结束后由磁棒(15)将结合物提取到3号位孔的清洗液中清洗，洗去未结合的样本；清洗结束后由磁棒套(5)将结合物提取到4号位孔开始第二步反应，反应结束后由磁棒套(5)将结合物依次通过5、6、7号位进行三次清洗，最终提取到8号位孔的预激发液中，添加激发液读取信号值。