[发明专利]一种C反应蛋白磁微粒检测试剂盒及其使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及C反应蛋白检测技术领域，尤其涉及一种C反应蛋白检测试剂盒及其使用方法。

背景技术

C-反应蛋白(C-reactive protein，CRP)由肝细胞合成，在胎儿期产生，非母体胎盘传递。其产生机理是：当机体受感染或组织受损伤时巨噬细胞和其他白细胞等被激活，产生白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子TNF-a等细胞因子及其他介导物，这些细胞因子和介导物到达肝脏，刺激肝细胞和上皮细胞合成CRP。在结构上，CRP含5个多肽链亚单位，非共价地结合为盘形多聚体，分子量为11.5万～14万，CRP是一种典型的急性时相蛋白。

常规CRP测定包括定性、半定量和定量分析，可用于评价感染，组织损伤和炎症性疾病。对于常规的CRP测定，参考值通常被认为是临床上含量高于10mg/L。在健康人群血液中CRP水平低于5mg/L，而在各种条件下，急性炎症4～8小时内，CRP值达到约20至500mg/L。常规CRP作为急性炎症评估指标比红细胞沉降率(ESR)和白细胞计数更敏感、更可靠。

超敏C反应蛋白常见的用途可作为心血管疾病风险识别的辅助手段。配合传统的急性冠脉综合征临床诊断使用，可作为冠状动脉疾病或急性冠脉综合征复发的预警指示物。

目前对C反应蛋白的免疫学检测，主要有免疫比浊法、免疫层析法、酶联免疫法和化学发光法等。

其中罗氏和雅培，以及目前C反应蛋白检测市场占有率最高的芬兰Quikread，均采用免疫比浊法。

免疫层析法分为胶体金法和荧光免疫层析，其中国内很多公司都采用了胶体金法，而荧光免疫层析则以韩国的i-chroma试剂为主，苏州光景生物和上海博阳生物则采用了时间分辨荧光免疫层析。

酶联免疫法使用的厂家较少，如深圳海格德生物。

化学发光免疫分析，是目前市场上免疫检测使用广泛、发展最为迅速的技术，它是用化学发光物质直接标记抗原或抗体，其发光强度与样本中的待测物浓度呈正相关。该方法灵敏度高、特异性好，根据其标记方法的不同，又可分为直接化学发光和酶促化学发光。深圳新产业检测C反应蛋白就采用了直接化学发光免疫分析法。

胶体金法，是由胶体金颗粒在硝酸纤维素膜上聚集成肉眼可见的有色条带，而判别样本中待测物的浓度，该方法最为方便快捷，但是其敏度较低，特异性较差。

荧光免疫层析，脱胎于胶体金法，把标记物从胶体金颗粒，替换为各种荧光纳米微球，借助仪器对荧光信号进行测定，然后计算出待测物的浓度。该方法由于是采用层析的反应模式，所以不同类型样本的层析形态和速度会对免疫反应产生影响，从而导致其重复性和特异性不能达到一个比较理想的水平。

免疫比浊法，是通过对液体浊度的检测而反映出待测物的浓度，该方法同样受样本性状的影响，如高血脂等样本会影响结果的判断。

化学发光法，以深圳新产业的产品为例，它采用的是直接化学发光免疫分析技术，发光标记物为异鲁米诺。该方法所用的试剂为均为大包装，检测时由移液器加到反应管中反应，该方法具有灵敏度高、特异性好、检测范围宽的优点，但是由于其包装盒检测方式所限，其检测的灵活性较差，且试剂一旦开封，其保存稳定性就会受到周围环境的影响。

发明内容

本发明为解决现有技术中的上述问题，提供一种可以定量检测全血、血清或血浆中C反应蛋白含量的检测试剂盒以及使用方法。

本发明所提供的C反应蛋白检测试剂盒及其使用方法，采用化学发光免疫分析技术，提高了C反应蛋白检测的灵敏度、特异性和精密性，并使检测能够适用于更多样本类型，且能够最大限度地消除样本差异对检测的影响，另外通过对包装和检测方式进行设计，提高了检测的灵活性，并规避了试剂开封后需要稳定保存的问题。

发明C反应蛋白检测试剂盒的原理：采用的是化学发光免疫分析技术，发光标记物为吖啶酯，而抗体包被载体为超顺磁微粒，免疫检测原理为双抗体夹心法。

磁微粒是指可均匀分散于一定基液中的胶态复合材料，本发明所用的磁微粒内核为Fe₃O₄，外壳为聚乙烯醇，表面修饰有链霉亲合素，直径为100nm，具有超顺磁性和极高的比表面积，且可以与生物素结合。