[发明专利]一种ACAT1基因干扰的嵌合抗原受体T细胞

说明书

本发明公开了一种ACAT1基因干扰的嵌合抗原受体T细胞的构建和应用。具体地，本发明提供了一种抑制ACAT1基因表达的干扰RNA，以及包含所述干扰RNA和嵌合抗原受体编码序列的核酸构建物，并基于所述shRNA和核酸构建物制备了增强型的CAR‑T细胞。本发明的干扰RNA可以有效抑制ACAT1基因的表达，显著增强CAR‑T细胞对肿瘤细胞的杀伤效率。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，更具体地涉及一种ACAT1基因干扰的嵌合抗原 受体T细胞。

背景技术

胆固醇是存在于哺乳动物细胞膜中的必需脂质分子,大多数器官和组织的 细胞通过内源性胆固醇生物合成满足了对膜胆固醇的需求。然而，异常高的胆 固醇水平，特别是游离(未酯化)胆固醇，对细胞有害。细胞可以通过抑制内 源性胆固醇生物合成和LDL受体表达，以应对胆固醇负荷。此外，这些细胞也 已经发展出其他机制来预防。通过胆固醇酰基转移酶(ACAT)，将游离胆固醇 转化为胆固醇酯，以防止细胞膜上的游离胆固醇过度积累。编码胆固醇酯化酶 的两个关键基因是Acat1和Acat2。Acat1广泛表达与各种细胞内，而Acat2主要 表达于肝脏和小肠。

大量的研究表明膜脂可以直接调节T细胞信号传导和免疫功能。胆固醇作 为细胞膜的关键组成部分，已被证明是形成T细胞受体(TCR)聚合和形成T细 胞免疫突触所必需的。

嵌合抗原受体T细胞(CART)免疫疗法是通过整合嵌合抗原受体的经过基 因修饰的T细胞来抵抗肿瘤细胞的疗法。嵌合抗原受体可以特异性识别肿瘤相 关抗原或者肿瘤特异性抗原，识别结合后将激活及增殖信号传递至T细胞内， 引起T细胞激活，增殖，释放细胞因子，从而杀伤肿瘤细胞。CART的杀伤效率 决定了其在体内的抗肿瘤效果，因此，如何提高CART的肿瘤杀伤效率具有关键 意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种ACAT1基因干扰的嵌合抗原受体T细胞。具体 地，本发明通过RNAi的方式干扰胆固醇酯化酶ACAT1基因，从而显著提升了CART 的肿瘤杀伤效率。

在本发明的第一方面，提供了一种核酸构建物，所述核酸构建物的结构如下 式A或式B所示：

B1-Z-B2 (A)

B2-Z-B1 (B)

式中，

各“-”独立地为键或核苷酸连接序列；

B1为第一表达盒，所述的第一表达盒用于表达抑制ACAT1基因表达的干扰RNA；

B2为第二表达盒，所述的第二表达盒用于表达嵌合抗原受体；

Z为任选的间隔序列。

在另一优选例中，所述的第二表达盒含有编码所述的嵌合抗原受体(CAR)的核 酸序列。

在另一优选例中，所述干扰RNA针对的靶序列如SEQ ID NO.:1所示。

在另一优选例中，所述的干扰RNA选自下组：shRNA，miRNA、piRNA、和siRNA。

在另一优选例中，所述的干扰RNA为shRNA。

在另一优选例中，所述的shRNA的序列如SEQ ID NO.:2所示。

在另一优选例中，所述的干扰RNA的序列如SEQ ID NO.:14所示。

在另一优选例中，所述的第一表达盒还包含第一启动子序列。

在另一优选例中，所述的第一启动子包括U6启动子。

在另一优选例中，所述的核苷酸连接序列的长度为m个核苷酸，其中m为1-20(较佳地1-10)的正整数。