[发明专利]一种油料植物白檀组培快繁方法

权利要求书

1.一种油料植物白檀组培快繁方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

（1）将白檀种子去除果肉，温水洗净，以确保白檀种子外壳没有油脂，备用；

（2）将洗净的白檀种子再用无菌水洗涤后浸泡于体积百分比浓度为75%的酒精溶液中25—35s，用无菌水冲洗后浸泡于体积百分比浓度为0.1%的升汞中8—12min，用无菌水冲洗后去除种皮和胚乳，取出种胚备用；

（3）以MS培养基为基本培养基，向基本培养基中加入琼脂粉、白砂糖和萘乙酸，调节pH值为5.8—6.4，得种胚培养基；所述种胚培养基中，琼脂粉的质量百分比浓度为0.6—0.7%，白砂糖的质量百分比浓度为2—4%，萘乙酸的浓度为0.03—0.07mg/L；将种胚接种至种胚培养基后于20—30℃进行暗培养15—20d，待根系发育完全形成完整植株，则进行散射光培养6—8d，待叶片舒展后转入光照培养，光照12h/d，光照强度为2000LX；至获得无菌苗，将无菌苗的根作为组培快繁的外植体，备用；

（4）以MS或改良MS为基本培养基，向基本培养基中加入琼脂粉、白砂糖、6-苄基氨基嘌呤和2,4-二氯苯氧乙酸，调节pH值为5.8—6.4，得胚性愈伤组织的诱导培养基；所述诱导培养基中，琼脂粉的质量百分比浓度为0.6—0.7%，白砂糖的质量百分比浓度为2—4%，6-苄基氨基嘌呤的浓度为0.1—0.3mg/L，2,4-二氯苯氧乙酸的浓度为0.1—0.3mg/L；将外植体接种至诱导培养基，于20—26℃进行避光培养15—20d，得胚性愈伤组织；

（5）以改良MS为基本培养基，向基本培养基中加入琼脂粉、白砂糖、6-苄基氨基嘌呤和2,4-二氯苯氧乙酸，调节pH值为5.8—6.4，得体细胞胚胎分化及增殖培养基；所述体细胞胚胎分化及增殖培养基中，琼脂粉的质量百分比浓度为0.6—0.7%，白砂糖的质量百分比浓度为2—4%，6-苄基氨基嘌呤的浓度为0.1—0.25mg/L，2,4-二氯苯氧乙酸的浓度为0.05—0.2mg/L；将胚性愈伤组织接种至体细胞胚胎分化及增殖培养基，于20—26℃进行避光培养15—25d，得分化后的体细胞胚；

（6）以改良MS为基本培养基，向基本培养基中加入琼脂粉、白砂糖和GA₃，调节pH值为5.8—6.4，得体细胞胚胎成熟及萌发培养基；所述体细胞胚胎成熟及萌发培养基中，琼脂粉的质量百分比浓度为0.6—0.7%，白砂糖的质量百分比浓度为2—4%，GA₃的浓度为0.5—2.0mg/L；将分化后的体细胞胚接种至体细胞胚胎成熟及萌发培养基，于20—26℃进行暗培养15—20d；当体细胞胚胎达到成熟的子叶胚的阶段时，转入大量元素减半的改良MS培养基中进行成熟体细胞胚的萌发培养，所述大量元素减半的改良MS培养基中加入白砂糖，白砂糖在大量元素减半的改良MS培养基中的质量百分比浓度为1.3—1.7%；萌发培养前10d采用避光培养，培养温度20—26℃，待根系发育完全，子叶伸展，苗高长至1.5cm时，转入光照培养，培养温度20—26℃，光照12h/d,光照强度为2000LX，培养20—25d。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）所述种胚培养基中，琼脂粉的质量百分比浓度为0.65%，白砂糖的质量百分比浓度为3%，萘乙酸的浓度为0.05mg/L。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（4）所述诱导培养基中，琼脂粉的质量百分比浓度为0.65%，白砂糖的质量百分比浓度为3%，6-苄基氨基嘌呤的浓度为0.25mg/L，2,4-二氯苯氧乙酸的浓度为0.15mg/L。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（5）所述体细胞胚胎分化及增殖培养基中，琼脂粉的质量百分比浓度为0.6—0.7%，白砂糖的质量百分比浓度为2—4%，6-苄基氨基嘌呤的浓度为0.25mg/L，2,4-二氯苯氧乙酸的浓度为0.1mg/L。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（6）所述体细胞胚胎成熟及萌发培养基中，琼脂粉的质量百分比浓度为0.65%，白砂糖的质量百分比浓度为3%，GA₃的浓度为0.5—2.0mg/L。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（6）所述白砂糖在大量元素减半的改良MS培养基中的质量百分比浓度为1.5%。