[发明专利]一种食品中酪氨酸的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及食品中氨基酸检测技术领域，特别涉及一种食品中酪氨酸的检测方法。

背景技术

氨基酸是构成生物体蛋白的最基本物质，也是生物体内活性肽、酶和其他一些生物活性分子的重要组成成分，与生命活动有着密切的关系。食品中含有丰富的氨基酸，为人体所需提供了不可或缺的营养成分。

目前，检测氨基酸的常用方法是高效液相色谱法，高效液相色谱法是利用衍生化试剂将荧光基团加在氨基酸的氨基上，然后通过荧光和紫外检测器进行检测，如中国专利CN104678044A公开了利用反相高效液相色谱检测茶叶中游离氨基酸的方法；中国专利CN 104181251 A公开了一种HPLC检测胱氨酸中酪氨酸含量的方法，但是这些方法存在灵敏度低、衍生剂昂贵、检测结果不准确的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种食品中酪氨酸的检测方法，提高检测结果的准确性和灵敏度。

本发明提供了一种食品中酪氨酸的检测方法，包括以下步骤：

(1)食品经无机酸浸提后，固液分离得到滤液；

(2)将所述步骤(1)得到的滤液依次进行调节pH值为中性和稀释，得到稀释液；

(3)在避光条件下，将所述步骤(2)得到的稀释液依次与丹磺酰氯进行衍生化反应和有机滤膜过滤，得到待测液，所述有机滤膜的孔径为0.45μm；

(4)将所述步骤(3)得到的待测液进行高效液相色谱分析，以保留时间定性，用外标法以标准方程计算得到食品中酪氨酸的含量，所述标准方程是以酪氨酸质量浓度为自变量、峰面积为因变量的方程；

所述高效液相色谱分析的色谱条件为：

分析柱：C-18柱；

流动相：有机相A:乙腈；水相B：乙酸钠缓冲液；

流速：1mL/min；

洗脱方式：梯度洗脱，0min，A:B＝45:55，10min，A:B＝65:35，12min，A:B＝75:25，18.5min，A:B＝45:55；

检测波长：252nm；

检测温度：40℃；

进样体积：20μL；

检测时间：35min；

检测器：二极管阵列检测器或紫外检测器。

优选地，所述步骤(1)中无机酸的浓度为0.1～1mol/L，所述食品的质量与无机酸的体积比为1g：10～15mL。

优选地，所述步骤(1)中浸提的时间为20～60min。

优选地，所述步骤(2)中调节pH值使用的溶液为碳酸钠缓冲液，所述碳酸钠缓冲液的pH值为9.5。

优选地，所述步骤(3)中稀释液中的酪氨酸与丹磺酰氯的质量比为1:1～1.1。

优选地，所述步骤(3)中衍生化反应的时间为2～4h。

优选地，所述步骤(4)中乙酸钠缓冲液的pH值为4.2。

优选地，所述标准方程的测定包括以下步骤：

(a)配制包含酪氨酸标准样品的待测溶液；

(b)将所述步骤(a)得到的待测溶液与丹磺酰氯进行衍生化反应，得到待测样品；

(c)将所述步骤(b)得到的待测样品进行高效液相色谱分析，得到待测样品的色谱图，所述高效液相色谱分析的色谱条件为：

分析柱：C-18柱；

流动相：有机相A:乙腈；水相B：乙酸钠缓冲液；

流速：1mL/min；

洗脱方式：梯度洗脱，0min，A:B＝45:55，10min，A:B＝65:35，12min，A:B＝75:25，18.5min，A:B＝45:55；

检测波长：252nm；

检测温度：40℃；

进样体积：20μL；

检测时间：35min；

检测器：二极管阵列检测器或紫外检测器；

以酪氨酸质量浓度为自变量、峰面积为因变量，得到酪氨酸的标准方程。

优选地，所述步骤(a)中待测溶液中酪氨酸的浓度为0.5～10.0μg/mL。