[发明专利]一种人Y染色体标签位点sY1291的检测方法及其应用

权利要求书

1.一种人Y染色体标签位点sY1291的检测方法，其特征在于，所述检测方法用于非诊断目的，具体步骤为：

(1)确定sY1291位点PCR引物的扩增区域，其策略是要避开欧洲男科学协会/欧洲分子遗传实验质控协作网联合出版的Y染色体微缺失2013版分子诊断操作指南中推荐的sY1291位点PCR引物的扩增区域，在欧洲男科学协会/欧洲分子遗传实验质控协作网推荐检测区域临近处的大片段重复区域设计新的特异性PCR扩增引物；所述检测区域I位于欧洲男科学协会/欧洲分子遗传实验质控协作网推荐sY1291位点检测区域上游38bp处；故选择的检测区域包括：I区：ChrY:25,504,754-25,505,032，II区：ChrY:25,207,966-25,208,244，III区：ChrY:26,841,711-26,841,989，IV区：ChrY:27,120,413-27,120,691；I区与II区位于欧洲男科学协会/欧洲分子遗传实验质控协作网推荐sY1291位点检测区域的上游，III区与IV区位于欧洲男科学协会/欧洲分子遗传实验质控协作网推荐sY1291位点检测区域的下游；I区的5’端距欧洲男科学协会/欧洲分子遗传实验质控协作网推荐sY1291位点检测区域3’端38bp；

(2)设计PCR扩增引物，核苷酸序列为SEQ ID No.1与SEQ ID No.2所示，该PCR扩增引物覆盖Yq11.223-Yq11.23区域的I区、II区、III区、IV区；

(3)利用PCR扩增引物，对人Y染色体标签位点sY1291进行检测,分为3种情况：

(a)采用DNA聚合酶进行PCR扩增，PCR扩增产物采用1.0％-2.0％琼脂糖凝胶电泳进行检测，无PCR扩增目标产物为样本sY1291位点缺失，有PCR扩增目标产物者为sY1291未缺失；

(b)对SEQ ID No.1所示核苷酸序列5’端或SEQ ID No.2所示核苷酸序列5’端进行荧光素标记，采用DNA聚合酶进行PCR扩增，PCR产物采用3500Dx或同类型基因测序仪进行毛细管电泳片段分析，出现PCR扩增目标产物荧光峰者为sY1291位点未缺失，未出现PCR扩增目标产物荧光峰者为sY1291位点缺失；

(c)设计荧光标记探针，其核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，采用实时荧光PCR方法进行检测，出现目标片段PCR扩增曲线者为sY1291位点未缺失，未出现目标片段PCR扩增曲线者为sY1291位点缺失。

2.根据权利要求1所述的人Y染色体标签位点sY1291的检测方法，其特征在于，采用PCR扩增引物：SEQ ID No.1与SEQ ID No.2所扩增人Yq11.223-Yq11.23区域I区、II区、III区与IV区的序列同源性＞99％。

3.根据权利要求1所述的人Y染色体标签位点sY1291的检测方法，其特征在于，步骤(3)中的情况(a)与情况(b)的反应体系中，PCR扩增引物SEQ ID No.1与SEQ ID No.2的工作浓度为50nmol/L至300nmol/L；情况(c)的反应体系中，PCR扩增引物SEQ ID No.1与SEQ IDNo.2的工作浓度为300nmol/L至500nmol/L，探针SEQ ID No.3的工作浓度为150nmol/L至250nmol/L。

4.用于人Y染色体标签位点sY1291的检测的PCR扩增引物，其特征在于，核苷酸序列为SEQ ID No.1与SEQ ID No.2所示。

5.如权利要求4所述的用于人Y染色体标签位点sY1291的检测的PCR扩增引物，其特征在于，还包括用于人Y染色体标签位点sY1291检测的探针，其核苷酸序列为SEQ ID No.3所示。

6.如权利要求1-3任一所述的人Y染色体标签位点sY1291的检测方法在人AZF微缺失检测中的应用，其特征在于，用于非诊断目的。