[发明专利]一种利用酪氨酸酶交联降低刀额新对虾过敏原原肌球蛋白过敏原性的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种利用酪氨酸酶交联降低刀额新对虾过敏原原肌球蛋白过敏原性的方法。

背景技术

刀额新对虾，商业名称为基围虾，是深受人们喜爱的一种水产食品，然而，其也是引起食源性过敏反应性疾病的常见食品之一。近年来国内外有关食源性虾过敏的报道屡见不鲜，在亚洲尤为常见。食物过敏反应的临床表现包括呼吸系统、胃肠道系统、中枢神经系统、皮肤、肌肉和骨骼等不同形式的临床症状，如荨麻疹、疱疹样皮炎、口腔过敏综合症、肠病综合症、哮喘及过敏性鼻炎等。严重的食物过敏可导致过敏性休克，甚至导致患者死亡。现已证实从海虾中分离出的原肌球蛋白（原肌球蛋白）是虾的主要过敏原，原肌球蛋白是一种34-38 kDa的蛋白质，具有卷曲螺旋二级结构，占总虾蛋白的6％，含糖约2 .9％。

避免食用致敏性食物是防止意外发生过敏反应的最佳方案，然而完全排除过敏原食品会对饮食产生一定的负面影响。通过有效降低食品致敏能力，对低过敏原性食品的发展进行深入研究，已成为当务之急。

酪氨酸酶是属于氧化酶组的含铜酶。它是一种双官能酶，可催化L-酪氨酸羟基化转变为L-多巴，也可氧化L-多巴形成多巴醌。由于它们具有高反应性，因此它们可以进一步发生反应。此外，多巴和酪氨酸（酪氨酸酶的天然底物）具有氧化蛋白质侧链中酪氨酸残基的潜力，从而可以形成共价的酪氨酸-赖氨酸，酪氨酸-半胱氨酸或酪氨酸-酪氨酸交联。

酪氨酸酶还能够与各种二酚和单酚化合物如咖啡酸，单宁酸，儿茶酚，苯酚等物质发生反应，可以用于蛋白质交联以改善食品的性质。此反应以被证明可以用于酪蛋白、乳清蛋白以及甲壳类过敏原精氨酸激酶的改性中。

如果能利用上述反应大幅度降低刀额新对虾过敏原原肌球蛋白过敏原性的致敏能力，对于该食品的安全性、商业价值以及市场普及都会产生积极的影响。

发明内容

为了解决现有技术中的问题，本发明提出一种利用酪氨酸酶交联降低刀额新对虾过敏原原肌球蛋白过敏原性的方法。其是通过以下技术方案实现的：

一种利用酪氨酸酶交联降低刀额新对虾过敏原原肌球蛋白过敏原性的方法，包括如下步骤：

A，将刀额新对虾原肌球蛋白用50mM的PBS缓冲液稀释成浓度为1-4mg/ml的原肌球蛋白；

B，向稀释后的蛋白中加入酪氨酸酶，该酶的添加量为20-2000nkat/g蛋白；或者向稀释后的蛋白中加入酪氨酸酶和0.1M的咖啡酸，其中酪氨酸酶的添加量为20-2000nkat/g蛋白；

将仅添加酪氨酸酶的蛋白以及添加酪氨酸酶和咖啡酸的蛋白均在37℃环境中持续反应24h，反应过程中保持持续震荡。

进一步的，所述步骤A具体为：将原肌球蛋白用50mM的PBS缓冲液稀释成浓度为2 mg/ml的原肌球蛋白。

进一步的，所述步骤B中，将仅添加酪氨酸酶的蛋白以及添加酪氨酸酶和咖啡酸的蛋白均放置于温度为37℃的水浴锅内进行振荡孵育，蛋白液体内加入干净的转子并保持匀速搅拌，反应时间为24h。

进一步的，所述步骤B反应完成后，将蛋白煮沸10分钟以终止反应，得到改性后的低过敏原性原肌球蛋白。

进一步的，所述步骤B中，向稀释后的蛋白中加入酪氨酸酶，该酶的添加量为1000 nkat/g蛋白；或者向稀释后的蛋白中加入酪氨酸酶和0.1M的咖啡酸，其中酪氨酸酶酶的添加量为1000 nkat/g蛋白。

低过敏原性原肌球蛋白的制备方法，

A，将刀额新对虾原肌球蛋白用50mM的PBS缓冲液稀释成浓度为1-4mg/ml的原肌球蛋白；

B，向稀释后的蛋白中加入酪氨酸酶，该酶的添加量为20-2000nkat/g蛋白；或者向稀释后的蛋白中加入酪氨酸酶和0.1M的咖啡酸，其中酪氨酸酶的添加量为20-2000nkat/g蛋白；

将仅添加酪氨酸酶的蛋白以及添加酪氨酸酶和0.1M的咖啡酸的蛋白均在37℃环境中持续反应24h，反应过程中保持持续震荡；

C，反应完成将蛋白煮沸10分钟以终止反应，得到改性后的低过敏原性原肌球蛋白。

本发明还提出酪氨酸酶在降低刀额新对虾过敏原原肌球蛋白过敏原性的应用。

本发明还提出酪氨酸酶和咖啡酸共同作用在降低刀额新对虾过敏原原肌球蛋白过敏原性的应用。

本发明还提出酪氨酸酶在制备低过敏原性原肌球蛋白的应用。

本发明还提出酪氨酸酶和咖啡酸共同作用在低过敏原性原肌球蛋白的应用。

本发明相对于现有技术所具有的优点为：