[发明专利]重组大肠杆菌及其在合成莱鲍迪苷D中的用途有效
申请号: | 201710875197.7 | 申请日: | 2017-09-25 |
公开(公告)号: | CN107446874B | 公开(公告)日: | 2020-07-28 |
发明(设计)人: | 王勇;华君 | 申请(专利权)人: | 四川盈嘉合生科技有限公司 |
主分类号: | C12N1/21 | 分类号: | C12N1/21;C12P19/56;C12R1/19 |
代理公司: | 成都希盛知识产权代理有限公司 51226 | 代理人: | 张徭尧;柯海军 |
地址: | 610000 四川省成都市高*** | 国省代码: | 四川;51 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 重组 大肠杆菌 及其 合成 莱鲍迪苷 中的 用途 | ||
本发明涉及重组大肠杆菌及其在合成莱鲍迪苷D中的用途,属于生物工程技术领域。本发明解决的是提供重组大肠杆菌及其在合成莱鲍迪苷D中的用途。该重组大肠杆菌为带有eugt11基因序列的转化子。本发明利用生物学方法,实现了重组大肠杆菌的构建,将eugt11基因引入大肠杆菌中诱导表达,得到重组蛋白酶,可用于催化RA转化成RD,为RD的生产提供了一条新途径。此外,本发明还采用重组大肠杆菌全细胞高效催化合成RD,为RD及更多天然化合物通过大肠杆菌全细胞转化法大规模生产奠定了基础。
技术领域
本发明涉及重组大肠杆菌及其在合成莱鲍迪苷D中的用途,属于生物工程技术领域。
背景技术
目前全世界的糖尿病患者大约占18岁以上总人口的9%,肥胖病患者更是超过了20亿。这些人群需要在饮食中严格控制糖类摄入,然而目前市场上大部分的无热量代糖都有健康隐患并不适合长期使用,因此市场需要新型安全代糖甜味剂。甜菊糖(steviolglycosides)是从甜叶菊(Stevia rehaudiana)叶片中提取分离得到的一类甜菊糖苷类化合物,因其甜度高、热量低、无毒性、耐高温、耐酸碱和水溶性好等优点,受到了科学界、产业界等多个领域的广泛重视,已被公认为新一代甜味剂。甜菊糖苷类化合物组分众多,均具有四环二萜母核并且有不同程度的糖基化修饰从不同程度的甜味口感。目前,甜菊糖苷类化合物中的含量相对丰富的甜菊苷(Stevioside.ST)、莱鲍迪苷A(RA)等已广泛应用于饮料、食品、调味剂、酒类、乳制品等食品加工领域。
虽然ST和RA具有高甜度,但是口感上还存在除甜味之外的苦后味。相比之下,莱鲍迪苷D(RD)具有更好的口感特性,是甜菊糖苷类甜味剂开发的新方向。以下为RA(Rebaudioside A)和RD(Rebaudioside D)的化学结构式:
然而,甜叶菊中RD这样高品质的珍稀组分含量极低,仅约占干叶重0.5%。用传统分离方法难以得到高纯度产品且产量也无法满足市场需要。
发明内容
针对以上问题,本发明的发明人发现来自水稻的糖基水解酶EUGT11在UDPG存在条件下,具有催化RA生成RD的活性。通过构建重组大肠杆菌,实现了RA催化合成RD,为RD的生产提供一种新方法。
本发明解决的第一个技术问题是提供一种重组大肠杆菌。
本发明重组大肠杆菌,为带有eugt11基因序列的转化子。
eugt11基因序列为现有的(Accession No.AK121682),在GenBank数据库中可以查到。
进一步的,该重组大肠杆菌优选采用如下方法制备得到:采用如下方法制备得到:将源于水稻的eugt11基因与载体pETDuet-1连接构建重组质粒,然后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,得到重组大肠杆菌。
本发明解决的第二个技术问题是提供本发明所述的重组大肠杆菌在催化莱鲍迪苷A转化成莱鲍迪苷D中的用途。
本发明的重组大肠杆菌,可作为全细胞催化反应的催化剂,用于催化RA转化成RD。
本发明解决的第三个技术问题是提供糖基水解酶在催化RA转化成RD中的用途,其中,所述糖基水解酶为eugt11基因编码得到的蛋白。
优选的,所述糖基水解酶为本发明所述的重组大肠杆菌经过诱导表达的产物。
本发明解决的第四个技术问题是提供RD的合成方法。
本发明RD的合成方法,采用本发明所述的糖基水解酶为催化剂,催化莱鲍迪苷A转化成莱鲍迪苷D;所述糖基水解酶为eugt11基因编码得到的蛋白。
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