[发明专利]一种多功能生物芯片的制备方法

说明书

本发明公开了一种多功能生物芯片的制备方法，包括如下步骤：步骤一：制作胶黏层，得到具有通孔的胶黏层；步骤二：将胶黏层固定在基底上；步骤三：通过胶黏层将AAO膜固定在基座上，且胶黏层通孔位置与AAO膜中心点重合；步骤四：在AAO膜上沉积金纳米颗粒；步骤五：在基底上取下带有金纳米颗粒的Au‑AAO膜；步骤六：在Au‑AAO膜带有金纳米颗粒的一侧滴加PEG缓冲溶液；步骤七：将滴加有PEG缓冲液的Au‑AAO膜避光保存后得到用于修饰生物分子后制成生物芯片的PEG‑Au‑AAO膜。本发明制备的生物芯片可在分离特定蛋白或细胞外囊泡的同时，对其进行快速的检测，简单高效；而且制备过程无有机化学试剂的使用，避免了对蛋白、细胞外囊泡的污染，可保存其生物活性，满足生物应用领域的使用要求。

技术领域

本发明涉及一种生产方法，更具体的说是涉及一种多功能生物芯片的制备方法。

背景技术

癌症是严重影响人类生活质量、威胁人类健康的疾病之一，如何有效地对癌症进行早期检测及治疗，依然是亟待解决的问题。传统的检测方法是基于细胞和组织的病理学检测，需要采用手术或穿刺的手段从患者身上获取相应的病变组织，不可避免地对患者造成一定的伤害。并且，某些癌症的早期症状不明显，极易错过最佳的治疗时间。近年来研究者发现，体液(如血液、唾液、腹腔液等)中的某些特定生物大分子和细胞外囊泡(如外泌体、微泡等)的动态变化能反映癌症的状态和发展，可用于癌症的早期诊断、预后判断及治疗效果的检测。但该方法的关键是开发一种有效可靠的分离、检测特定生物大分子和细胞外囊泡的方法。

分离肿瘤相关的特定生物大分子和细胞外囊泡的主要方法有离心法、沉淀法、透析法、过滤法、层析法和电泳法等。这些方法各具优点和特色，均可在一定程度上实现待测物的的分离。待测物分离后，还需额外的步骤对其进行转移、检测，以达到定性或者定量分析的目的。这些都不可避免地存在操作步骤繁琐、耗时长、产量低等问题。因而，本领域仍然需要开发一种简便可行的、可同时对体液(如血液、唾液、腹腔液等)、组织裂解液中的特定生物大分子(蛋白质、多糖、糖蛋白)或者细胞外囊泡进行分离和检测的器件和方法。生物芯片在生物、化学、医学检测中广泛使用，利用生物芯片可以实现待检测的快速、高通量的检测。对生物芯片表面的结构、形貌和光学特性的改造，可提高对待测物的检测灵敏度和特异性，而现有技术中缺乏准确有效的方法对生物芯片表面的结构、形貌和光学特性进行有效的改造。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种简便可行的对生物芯片的结构、形貌和光学特性进行有效改造的方法。

为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：一种多功能生物芯片的制备方法，包括如下步骤：

一种多功能生物芯片的制备方法，包括如下步骤：

步骤一：制作胶黏层，得到具有通孔的胶黏层；

步骤二：将胶黏层固定在基底上；

步骤三：通过胶黏层将AAO膜固定在基座上，且胶黏层通孔位置与AAO膜中心点重合；

步骤四：在AAO膜上沉积金纳米颗粒；

步骤五：在基底上取下带有金纳米颗粒的Au-AAO膜；

步骤六：在Au-AAO膜带有金纳米颗粒的一侧滴加PEG缓冲溶液；

步骤七：将滴加有PEG缓冲液的Au-AAO膜避光保存后得到用于修饰生物分子后制成生物芯片的PEG-Au-AAO膜。

作为本发明的进一步改进：

所述步骤六为在Au-AAO膜带有金纳米颗粒的一侧滴加PEG缓冲溶液，之后再取另一Au-AAO膜的将具有金纳米颗粒的一面覆盖在PEG缓冲溶液上，得到Au-AAO膜/PEG/Au-AAO膜复合体，并避光保存；

所述步骤七为避光保存后的复合体，用镊子分开，得到用于修饰生物分子后制成生物芯片的PEG-Au-AAO膜。