[发明专利]一种通过测定细胞因子含量评价冻干粉生发作用的方法

说明书

本发明公开了一种通过测定细胞因子含量评价冻干粉生发作用的方法，涉及生物工程领域，包括冻干粉的制备、毛囊相关细胞培养、冻干粉与毛囊相关细胞共培养、培养后细胞及上清液收样与检测四个步骤。本发明选取的评价细胞均与毛囊的发生发育相关，本发明是种间接可行，可用于体外评价产品毛发再生作用的方法，且具有操作简单，重复性强的优点，可作为后续产品质检的一种有效评价方法。

技术领域

本发明涉及生物工程领域，尤其涉及一种通过测定细胞因子含量评价冻干粉生发作用的方法。

背景技术

脱发是世界性皮肤问题，大约50%的成年男人受到脱发的困扰。中国有1亿多脱发患者，脱发人群中90%以上都属于雄性激素型脱发。随着人们越来越关注自己的头发问题，各种生发技术也得到了迅速发展。

毛发移植作为目前国际上有效的治疗毛发脱失的一项新技术，正在被越来越多的人所接受。但毛发移植必需获取自身后枕部健康毛囊，再移植到前额或头顶的脱发区。对于本身毛发稀少或受区过大的患者，常常会存在毛发不足的现象，且毛发移植手术价格昂贵，部分患者不能接受。目前国内外用于治疗脱发的药品主要为西药，如米诺地尔，其经头皮吸收后可扩张头皮下血管，改善毛囊周围的微循环，减少毛囊周围炎症细胞浸润，从而使萎缩的毛囊增大并促进毛发的生长，使毳毛变成终毛；此外，非那雄胺也是一种疗效较好的药物，通过抑制5α-还原酶的活性以阻止雄性激素的合成。但米诺地尔和非那雄胺主要是针对雄激素性脱发，有一定局限性，且要长期坚持用药，对人体势必会产生副作用。国内也有很多主要成分为中药的产品，但是由于其成分单一，没有从毛囊生理性生长的角度去解决问题，所以效果并不显著。

随着对毛囊微观结构及毛发再生机理研究的深入，人们发现毛发再生受到毛囊自身干细胞及毛囊周围干细胞微环境的综合调控。干细胞是一类具有自我复制，自我更新的原始细胞，具有向多种组织细胞分化的能力，在体内能通过分泌多种调控因子从而调节组织器官的正常生理代谢。因此，开发针对于毛囊部位干细胞微环境修复的干细胞再生产品成为治疗脱发的发展趋势。

目前市面上的干细胞产品，有各种人工合成的干细胞因子冻干粉产品，干细胞培养后制备的冻干粉产品，均是通过直接作用于头皮，调控毛囊相关细胞生长微环境而达到生发的效果。但是，对于这些产品的质量评价，仍没有可借鉴的方法。如果通过直接作用于人体后观察效果，耗时耗力，且不利于多种产品的功效对比。因此，建立一种体外评价产品质量的评价体系已经迫在眉睫。

毛囊相关细胞，包括毛囊表皮成分细胞及真皮成分细胞，表皮成分细胞在合适的诱导条件下，可以重新形成毛囊表皮、毛囊及皮脂腺。毛囊真皮成分细胞可以是人毛乳头干细胞或人成纤维干细胞的一种。毛乳头组织是诱导形成毛发的主要间充质组织，毛乳头细胞则具有较强的诱导能力，能诱导毛囊基质细胞的增殖及毛干的形成。人成纤维细胞是皮肤真皮层重要的间充质部分，而毛囊的发生发育是上皮-间充质相互作用的结果。因此，选用毛囊相关细胞可间接评价冻干粉的活性。

发明内容

本发明实施例提供了一种通过测定细胞因子含量评价冻干粉生发作用的方法，选取的评价细胞均与毛囊的发生发育相关，本发明是种间接可行，可用于体外评价产品毛发再生作用的方法，且具有操作简单，重复性强的优点，可作为后续产品质检的一种有效评价方法。

为达到上述目的，本发明实施例采用如下技术方案：

本发明的技术方案具体如下：所提供的冻干粉生发作用的评价方法， 包括以下步骤：

步骤一：冻干粉的制备

培养间充质干细胞，收集细胞条件培养液，通过两次浓缩、液体蛋白含量测定后，按照含量测定结果添加冻干保护剂，使用冷冻干燥机进行冻干，得到间充质干细胞冻干粉。