[发明专利]癌基因BRCA1和BRCA2的快速诊断试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术和医学领域，具体涉及一种癌基因BRCA1和BRCA2的快速诊断试剂盒。

背景技术

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，其发病率在全球呈明显的上升趋势，从而严重危害着广大妇女的身心健康。尽管我国目前乳腺癌发病率低于西方国家，并不属于乳腺癌高发地区，但是随着工业化的发展，环境因素的影响以及人们生活方式的改变，乳腺癌的总发病率正在迅速增长。2008年统计结果显示，乳腺癌在城市地区女性肿瘤发病率中位居第一，且年新发乳腺癌病例增至20万，并有发病年龄年轻化趋势。

乳腺癌的发病机理尚不清楚，目前相关研究倾向于其发生发展是乳腺上皮细胞在多种致癌因素作用下发生基因突变和异常增生的结果。研究发现，在乳腺癌患者中约5％-10％的病例具有家族聚集性和遗传倾向性，因此乳腺癌可分为遗传性和散发性两大类。1994年由Miki等成功克隆分离出第一个与家族性乳腺癌和卵巢癌相关的基因，即乳腺/卵巢肿瘤易感基因1(Breast Cancer Susceptibility Gene 1，BRCA1)，随后Wooste等发现的位于人类染色体13q12-1上的基因，即乳腺/卵巢肿瘤易感基因2(Breast Cancer Susceptibility Gene 2，BRCA2)。BRCA1基因被认为是基因组的看护者，主要的生物学特性是参与损伤修复DNA、调节细胞周期以及转录调控基因。该易感基因发生突变时，表现为编码蛋白功能降低或丧失，影响细胞分化，从而使细胞失去正常的分化与增殖作用，最终导致细胞恶变，发展为恶性肿瘤。BRCA2基因的编码蛋白十分庞大，在多个组织中有其表达，目前其生物学特性尚不清楚。有报道指出，BRCA2对细胞周期的调节有重要作用。

中国专利申请(CN101921831A)公开了一种检测BRCA基因突变的PCR反应试剂盒，所述试剂盒包括用于特异性扩增BRCA基因靶向序列的若干个引物对，所述引物对含有BRCA1基因的第2外显子或BRCA1基因的第20外显子或BRCA2基因的第11外显子中至少15个连续的核苷酸构成的连续核苷酸序列，所述BRCA1基因的第2外显子具有SEQ ID No：1的连续核苷酸序列；所述BRCA1基因的第20外显子具有SEQ ID No：2的连续核苷酸序列；BRCA2基因的第21外显子具有SEQ ID No：3的连续核苷酸序列。其主要是利用HRM技术来进行BRCA1/2突变基因的检测，HRM技术是近年来国内外兴起的一种全新的突变扫描和基因分型的分析方法。基于高效稳健的PCR技术，HRM不受突变碱基位点与类型局限，无需序列特异性探针，在PCR结束后直接对PCR产物进行溶解分析，即可完成对样品突变、单核苷酸多态性-SNP、甲基化、HLA配型等的分析。对于在血浆和血清中DNA含量很低的情况下，使用该方法仍可以用该方法进行BRCA1/2基因突变的检测，突破了微量无法检测或检测效率低的障碍。

因此，获得更高质量的PCR产物是准确检测BRCA1/2突变基因所需要的。

发明内容

为克服上述问题，本发明提供了一种癌基因BRCA1和BRCA2的快速诊断试剂盒。本发明试剂盒成本低，操作简单；本发明试剂盒及其检测方法对使用仪器设备、DNA模板要求低，而取得的扩增产物特异性高。本发明还提供了一种试剂盒的检测方法。

本发明通过以下技术方案实现：

一种癌基因BRCA1和BRCA2的快速诊断试剂盒，包括DNA聚合酶，MgCl₂，dNTP，上游引物，下游引物，阳性对照，阴性对照，Enhence Buffer，荧光染料及二次蒸馏水。

所述Enhence Buffer由甘油20-30μg/mL，甲酰胺0.1-0.5uL/mL，3-二氧化噻吩烯0.5-1.5uL/mL和血清白蛋白100-150μg/mL组成。

所述上游引物如SEQ ID NO：1所示。

所述下游引物如SEQ ID NO：2所示。

优选地，所述Enhence Buffer由甘油27.5μg/mL，甲酰胺0.45uL/mL，3-二氧化噻吩烯0.65uL/mL和血清白蛋白125μg/mL组成。

优选地，所述阴性对照为二次蒸馏水，阳性对照为含癌基因BRCA1和BRCA2DNA样品。

优选地，所述荧光染料为ResoLight染料。

优选地，所述样品预处理中缓冲液由8mM Tris-HCl，1.5mM EDTA-2Na，20mM氯化铵和体积含量10％的甘油组成。