[发明专利]一种平板固体培养基分离纯化裸藻藻种的方法

权利要求书

1.一种平板固体培养基分离纯化裸藻藻种的方法，其特征在于，依次包括以下步骤：

a取一定量的有细菌污染未分离纯化的裸藻藻液，对所述裸藻藻液进行离心，将离心得到的藻泥清洗并收集；

b对步骤a收集的藻泥进行稀释，得稀释液，备用；

c配制裸藻自养所需液体培养基，向该液体培养基中加入琼脂粉，通过蒸汽灭菌锅灭菌，得灭菌后的培养基；

d待灭菌后的培养基冷却后，向其中加入抗生素，混匀，倾倒平板；

e取步骤b所得稀释液50～100μL，置于平板中，均匀涂布；

f将涂布平板置于恒温光照箱进行培养；

g挑取单藻克隆，将其置于步骤d的培养基中进行二次划线接种分离，然后将划线平板置于恒温光照箱进行培养；

h将划线平板中的单藻克隆转移至无菌96孔细胞培养板，恒温光照箱进行培养；

i将96孔细胞培养板的藻液转移至三角瓶中，恒温光照箱进行扩大培养，即得裸藻藻种。

2.根据权利要求1所述的一种平板固体培养基分离纯化裸藻藻种的方法，其特征在于步骤a中离心步骤包括：

1)将裸藻藻液置于离心瓶中，设定离心转速为3000～5000rpm，时间为1.0～3.0min；

2)倾去上层液体，经离心后的藻泥沉淀在离心瓶底部，向该离心瓶中加入经灭菌后的生理盐水，涡旋混匀；

3)进行二次离心，设定离心转速为3000～5000rpm，时间为1.0～3.0min；

4)重复步骤2)和3)后，将所得藻泥合并收集。

3.根据权利要求1所述的一种平板固体培养基分离纯化裸藻藻种的方法，其特征在于：步骤b中，通过灭菌后的生理盐水对藻泥进行稀释，稀释倍数为10^-3～10^-6。

4.根据权利要求1所述的一种平板固体培养基分离纯化裸藻藻种的方法，其特征在于：裸藻自养所需液体培养基，每升去离子水中其它组分配比为：硝酸钠50～100mg/L、磷酸二氢钾5～10mg/L、乙二胺四乙酸钠3～6mg/L、硫酸锌0.010～0.030mg/L、硫酸铜0.01～0.02mg/L、氯化锰0.010～0.020mg/L、硫酸镁20～40mg/L、硫酸铁30～70mg/L、氯化钙1.0～1.5mg/L、钼酸铵0.003～0.007mg/L、维生素B1 0.001mg/L、维生素B12 0.005mg/L、生物素0.005mg/L和氯化钴0.010～0.020mg/L。

5.根据权利要求1所述的一种平板固体培养基分离纯化裸藻藻种的方法，其特征在于：步骤c中，所述琼脂粉的加入量占液体培养基质量的0.5％～1.0％。

6.根据权利要求1所述的一种平板固体培养基分离纯化裸藻藻种的方法，其特征在于：步骤d中，所述抗生素及添加浓度分别为青霉素20～60ppm、氯霉素20～60ppm、土霉素30～70ppm、链霉素40～80ppm。

7.根据权利要求1所述的一种平板固体培养基分离纯化裸藻藻种的方法，其特征在于：所述步骤f、g、h、i中的恒温光照箱培养条件为：光照度1000～3000lx，温度22～28℃，光暗比L:D＝12h:12h，培养2～5天。

8.根据权利要求1所述的一种平板固体培养基分离纯化裸藻藻种的方法，其特征在于：步骤i所述的96孔细胞培养板中，每孔液体培养基的添加量为0.3～0.5mL。